【摘 要】
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隔山消为萝藦科鹅绒藤属植物耳叶牛皮消(Cynanchum auriculatum Royle ex Wight)的块根,主要分布于贵州、四川、云南等地。具有补肝肾、强筋骨、益精血、乌须发、健脾消食,解毒疗疮等功效,现代研究表明其具有清除自由基、提高特异和非特异性免疫等生物活性,其免疫活性成分主要为C21甾体皂苷和糖类,且短糖链(1-2糖基)C21甾体免疫活性高于长糖链的C21甾体苷,高于苷元。发酵
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隔山消为萝藦科鹅绒藤属植物耳叶牛皮消(Cynanchum auriculatum Royle ex Wight)的块根,主要分布于贵州、四川、云南等地。具有补肝肾、强筋骨、益精血、乌须发、健脾消食,解毒疗疮等功效,现代研究表明其具有清除自由基、提高特异和非特异性免疫等生物活性,其免疫活性成分主要为C21甾体皂苷和糖类,且短糖链(1-2糖基)C21甾体免疫活性高于长糖链的C21甾体苷,高于苷元。发酵是人们认识较早的一类生物化学反应,由于它对食品、药品等进行的修正可满足人类健康或其他方面的要求,在食品、生物、化学领域得到广泛应用。本实验通过探讨隔山消发酵前后免疫活性及其成分变化情况,为隔山消后续开发的提供参考。在优化最佳发酵条件、对比免疫活性、化学成分分离、含量检测系列实验基础上,获得如下结果:1、在发酵菌种适宜发酵环境基础上,以免疫活性成分C21总甾苷含量为指标,通过正交实验对隔山消的发酵条件进行优化,得到发酵最佳条件为温度为35℃、料液比为1:6、用曲量0.5%、时间15 d。2、以隔山消发酵液作为研究对象,市售提高免疫功能的大光荣冬虫夏草口服液为阳性对照,采用环磷酰胺建立免疫低下模型,考察不同浓度下隔山消发酵液及隔山消醇提液小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红血细胞能力及免疫器官情况,得出隔山消发酵液其免疫活性优于原药材,且在高剂量时免疫功效优于大光荣冬虫夏草菌丝体口服液。由此得出隔山消在经过发酵操作后,免疫活性增强。3、利用硅胶、Sephadex LH-20、HPLC及重结晶等操作从隔山消发酵液中分离得到22个化合物,分别鉴定为2,4-二羟基苯乙酮(1),2,5-二羟基苯乙酮(2),白首乌二苯酮(3),告达亭苷元(4),开德苷元(5),萝藦苷元(6),没食子酸(7),齐墩果酸(8),去乙酰萝藦苷元(9),山梨糖醇(10),亚油酸(11),β-香树酯醇乙酸酯(12),β-香树酯醇(13),告达亭3-O-α-L-磁麻吡喃糖基-(1→4)-β-D-夹竹桃吡喃糖基-(1→4)-β-D-磁麻吡喃糖苷(14),告达亭3-O-β-D-夹竹桃吡喃糖基-(1→4)-β-D-夹竹桃吡喃糖基-(1→4)-β-D-磁麻吡喃糖苷(15),开德3-O-β-D-磁麻吡喃糖基-(1→4)-α-L-迪吉吡喃糖基-(1→4)-β-D-磁麻吡喃糖苷(16),20-O-acetyl-12-O-cinnamoyl-3-O-(β-D-cymaropyranosyl)-8,14-dioxo-8,14-secosarcostion(17),β-谷甾醇(18),告达亭3-O-α-L-迪吉吡喃糖基-(1→4)-β-D-磁麻吡喃糖苷(19),告达亭3-O-α-L-迪吉吡喃糖基-(1→4)-β-D-夹竹桃吡喃糖基(20),Saccatol G(21),开德3-O-α-L-迪吉吡喃糖基-(1→4)-β-D-磁麻吡喃糖苷(22)。其中化合物7,10,11为发酵过程中产生的成分,化合物17为新化合物。4、利用高效液相色谱对所含主要化学成分C21甾苷的含量变化检测,隔山消在经发酵操作后中化合物4含量由1.555 mg·g-1增为2.140 mg·g-1,化合物20含量由0.083mg·g-1增为0.104 mg·g-1;化合物15含量由0.671 mg·g-1降为0.105 mg·g-1、化合物17含量由0.063 mg·g-1降为0.038 mg·g-1、化合物19含量由0.072 mg·g-1降为0.012 mg·g-1。综上,通过对隔山消发酵前后免疫活性及其成分进行分析检测,随着C21甾体皂苷糖基含量减少免疫活性随之增强。
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