论文部分内容阅读
目的：探讨新型偶联合成药物YIGSR-DOX对不同67-LR表达水平的肿瘤细胞的靶向抑制作用。 方法：用固相多肽合成法合成新型偶联的药物YIGSR-DOX。选择四种肿瘤细胞，人神经胶质瘤U251细胞、人肺癌A549细胞、人肺癌IMR-90细胞和鼠肝癌H22细胞。PCR实验检测四种肿瘤细胞67kD层黏蛋白受体（67-LR）基因水平的表达情况；Western免疫印迹（Western blot）检测细胞67-LR蛋白水平的表达情况；流式细胞仪和荧光显微镜检测YIGSR-DOX靶向抑制肿瘤细胞的机制及其在细胞内的分布状况；MTT试验检测不同浓度的DOX和YIGSR-DOX对细胞的抑制毒性作用，比较两者的毒性大小。 结果：PCR和Western blot结果显示，不管是基因水平，还是蛋白水平，IMR-90细胞都是低表达67-LR抑或不表达67-LR，而其余三种细胞U251细胞、A549细胞、和H22细胞均是高表达67-LR。流式细胞仪检测结果提示，高表达67-LR的细胞U251细胞、A549细胞、H22细胞中的DOX含量明显高于低表达67-LR的IMR-90细胞，而DOX培养的四种细胞胞内DOX的含量相差不明显。荧光显微镜的结果显示，无论细胞培养时间长短，DOX可以自由的通过细胞膜和细胞核膜，并且高、低两种不同受体表达的细胞内荧光强度无明显差异，而YIGSR-DOX处理的细胞短时间培养时，红色荧光只分布在胞浆中，围绕细胞核呈环状分布，细胞核内未见分布，长时间培养后，高强度DOX荧光不仅分布在胞浆，也分布在细胞核内，并且67LR高表达的U251细胞内的荧光强度比IMR-90强。MTT实验结果显示，无论培养时间长短，YIGSR-DOX对高表达67-LR细胞的毒性均比DOX低，并且对于同一种高表达67-LR的细胞，长时间培养时，YIGSR-DOX的IC50值比DOX低。 结论：通过实验证明，YIGSR-DOX新型偶联化合物可与细胞膜表面67-LR蛋白受体结合，通过67LR的介导，靶向抑制高表达67LR细胞。小分子脂溶性DOX依浓度梯度被动扩散的方式，在非常短的时间内即可通过生物膜，进入细胞内并扩散至细胞核，荧光分布的特征和强度与细胞67LR的表达水平及孵育的时间无关。而YIGSR-DOX可透过67LR介导进入细胞，但不能自由地扩散到细胞核内，需在胞浆酶的作用下分解并释放出游离的DOX才能进入胞核。与DOX相比较，YIGSR-DOX的毒性作用小，但是在抑制细胞作用上，与DOX效果相当，甚至更好。