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本试验研究饲养密度和饲粮添加25-羟基维生素D3（25-OH-D3）对蛋鸡生产性能、蛋品质和肠道健康的影响。试验选用800只45周龄罗曼粉壳蛋鸡,采用2*2因子试验设计,设4个处理,每个处理10个重复,低饲养密度为506 cm2/只,高饲养密度为338 cm2/只,在高低饲养密度中,分别添加0和69μg/kg的25-OH-D3,试验期为16周。结果表明:（1）高饲养密度降低蛋鸡的产蛋率,平均蛋重（除12-16周）,平均日采食量（除9-12周）（P<0.05）。而饲粮添加25-OH-D3对各个阶段的产蛋率、蛋重、平均日采食量和料蛋比均无显著影响（P>0.05）。高饲养密度在16周时降低了蛋壳强度（P<0.05）、蛋壳厚度（P<0.01）、蛋壳相对重（P<0.01）,提高了蛋壳颜色的亮度值（L*）（P<0.05）,降低了蛋壳红色值（a*）（P<0.01）和黄色值（b*）（P<0.05）。25-OH-D3在第4周时显著的增加了蛋壳厚度（P<0.05）,在第4周和第8周时增加了蛋壳的相对重量（P<0.05）。高饲养密度的情况下,饲粮添加25-OH-D3提高了蛋壳厚度（交互效应,P<0.05）;25-OH-D3在第4、12和16周时显著的降低了蛋壳的L*值（P<0.05）,在12周时增加了蛋壳的a*值（P=0.09）,在第4、12和16周时增加了蛋壳的b*值（P<0.05）。（2）高饲养密度显著的增加了蛋鸡血清中睾酮（P<0.01）、皮质酮（P<0.05）和内毒素（P<0.05）的含量;饲粮添加25-OH-D3显著的降低了皮质酮和内毒素的含量（P<0.05）,升高了碳酸酐酶的含量（P<0.01）。在高饲养密度时饲粮添加25-OH-D3对促卵泡刺激素的升高作用更明显（P<0.05）;在高饲养密度时25-OH-D3显著的降低了二胺氧化酶的含量（P<0.05）;在高饲养密度时饲粮添加25-OH-D3对血清中25-OH-D3的含量升高作用更明显（P<0.05）。（3）高饲养密度显著的降低了蛋鸡胫骨中灰分的含量和钙含量（P<0.05）,25-OH-D3有增加胫骨强度（P<0.05）。高饲养密度显著的降低了甲状旁腺素的含量（P<0.05）,升高了骨钙素的含量（P<0.05）;25-OH-D3显著的降低了骨钙素的含量（P<0.01）,升高了降钙素的含量（P<0.01）。高饲养密度骨髓腔中的髓质骨小梁稀疏断裂,胫骨的结构较差,25-OH-D3髓质骨小梁连接紧密,胫骨结构良好。（4）高饲养密度显著的降低了蛋鸡十二指肠的隐窝深度（P<0.05）和回肠的绒隐比（P<0.01）;25-OH-D3显著的增加了十二指肠的绒毛高度（P<0.05）、空肠的绒毛高度（P<0.01）和隐窝深度（P<0.05）,有显著增加十二指肠绒隐比的趋势（P=0.09）;在高饲养密度时,饲粮添加25-OH-D3显著的增加了回肠的绒毛高度和隐窝深度。高饲养密度显著的上调了MUC-1的表达（P<0.05）。饲粮添加25-OH-D3显著的下调了MUC-1的表达量,显著的增加了MUC-2的表达量（P<0.05）。在高饲养密度时饲粮添加25-OH-D3显著的上调了Occludin的表达量（交互效应,P<0.05）。在高饲养密度时25-OH-D3显著的增加了T-AOC的活力（交互效应,P<0.05）。在菌群组成中,盲肠中优势菌门为拟杆菌门（Bacteroidetes）和厚壁菌门（Firmicutes）,分别约占40.50%～60.28%和32.26%～51.21%。高饲养密度显著的降低了拟杆菌门（P<0.05）和螺旋菌门占比（P<0.01）,显著的提高了厚壁菌门的占比（P<0.05）;在高饲养密度情况下饲粮添加25-OH-D3降低了拟杆菌门占比,增加了厚壁菌门的占比（交互效应,P<0.05）。盲肠中优势菌属为拟杆菌属（Bacteroides）约占16.68%～26.61%,其次为乳杆菌属（Lactobacillus）、粪便杆菌属（Faecalibacterium）、脱硫弧菌（Desulfovibrio）。高饲养密度显著的增加了乳杆菌属（P<0.05）和罗布西亚菌属（P<0.05）的占比。在高饲养密度情况下饲粮添加25-OH-D3降低了拟杆菌属的占比（交互效应,P<0.05）。上述试验结果表明:蛋鸡高密度饲养降低了生产性能和蛋壳质量（颜色、厚度）,损伤肠道功能（形态、LPS、MUC-1表达量）,导致肾脏损伤（形态、细胞凋亡）,降低了骨骼质量（灰分、钙含量）,使骨转化作用增强（PTH、BGP水平）;饲粮添加25-OH-D3能够改善蛋壳质量（颜色、厚度）,能够增强肠道物理屏障（MUC-1、MUC-2、Occludin表达量）,降低肠道损伤（形态、LPS、DAO水平）,增加骨骼质量（形态、骨骼强度）,增强骨吸收作用（BGP、CT水平）,降低蛋鸡肾脏损伤（形态、细胞凋亡）,能够改变肠道的菌群组成。说明饲粮添加25-OH-D3一定程度上缓解高饲养密度对产蛋后期蛋鸡带来的不利影响。