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背景:食管癌(Esophageal Carcinoma EC)是一种威胁人类健康和生命常见恶性肿瘤。我国食管癌以鳞状细胞癌多见,我国亦是食管癌发病率和死亡率较高的国家之一。食管鳞癌(Esophageal Squamous cell carcinoma,ESCC)是其最常见的组织学类型,对于早期食管癌的预后较好,中晚期患者手术、放化疗等治疗的预后极差。正是因为食管癌的发病率及死亡率较高,使得它的病因学研究就成为肿瘤研究的热点。染色质解旋酶DNA结合蛋白1样基因(Chromosomal helicase/ATPase DNA binding protein1-like CHD1L)是新发现的一种癌基因位于chr1q21,它在许多实体肿瘤中扩增。CHD1L是SNF-2类家族成员,具有高度保守的解旋酶功能,可调控转录、重组染色质并调节DNA与蛋白质之间的相互作用。已有研究表明,CHD1L在肝癌中表达比正常肝脏组织中高,且与组织分化程度和临床分期呈正相关,并可提高肿瘤细胞的转移和侵袭。然而,在食管癌中CHD1L蛋白表达及其临床意义是不确定的,更缺乏CHD1L在食管癌细胞系中生物学功能的研究。本文首次研究了CHD1L与不同病理生理特征的食管癌的关系,并探讨CHD1L在食管癌细胞系中的生物学功能,从而为进一步的研究奠定基础。目的:(1)免疫组化检测CHD1L在不同食管癌组织中的表达情况,探讨其与食管癌发生、发展、预后的相关性;为临床诊断、治疗和预后的评估提供理论依据。(2)Westerblot检测CHD1L在不同人类食管癌细胞株中的蛋白水平的表达,为后续生物学功能的研究做准备。(3)通过siRNA转染敲低内源性CHD1L表达,探讨CHD1L基因的增殖、凋亡、迁移等生物学功能,为深入探讨该基因在食管癌发生发展中的作用机制,寻找新的食管癌生物治疗提供理论依据。材料方法:(1)免疫组织化学:通过石蜡切片技术和免疫组化-SP的方法,检测在不同食管癌患者癌组织中CHD1L表达情况。选取福建省肿瘤医院胸外科手术切除治疗的191例食管癌存档蜡块为实验对象。(2)应用SPSS 22统计软件包整理病人的临床病理资料和随访资料;运用Kaplan-Meier法(Log-rank检验)、单因素及COX多因素回归模型,对食管癌患者进行生存分析,为临床诊断、治疗和预后的评估提供理论依据。(3)Western blot:分析CHD1L在不同食管癌细胞株中蛋白水平的表达情况,并筛选出内源性高表达CHD1L基因的细胞株。实验所用的食管癌细胞株为KYSE150和EC9706。为后续探讨其生物学功能做准备。(4)以EC9706细胞株为研究对象,应用siRNA转染技术、细胞划痕、CCK-8细胞增殖、流式细胞仪等技术和方法初步探讨CHD1L基因在人食管癌细胞中的迁移、增殖、凋亡等生物学功能。结果:(1)免疫组化结果表明:不同食管癌组织中CHD1L表达程度不同,且其表达随肿瘤恶性程度增高而增高(P<0.05)。CHD1L表达与食管癌的分化程度、临床分期和淋巴结有无转移相关(P<0.01)。CHD1L的表达与食管癌患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、肿瘤大体分型均无相关性(P>0.05),差异无统计学意义。(2)影响预后的单因素分析表明:CHD1L蛋白的高表达对食管癌患者的总生存率(包括3年生存率、5年生存率)均具有非常显著的影响(P<0.01);食管癌临床分期、分化程度及淋巴结转移情况对患者的预后有显著的影响(P<0.01)。而食管癌患者的年龄、性别、肿瘤大体分型、肿瘤大小、肿瘤病变部位对其预后无明显的影响(P>0.05),差异无统计学意义。(3)影响预后的多因素Cox模型分析表明:食管癌患者肿瘤的分化程度、病理分期及淋巴结转移情况是对其生存有影响的危险因素(P<0.05),差异有统计学意义。(4)Westernblot结果表明:EC9706细胞株中的内源性CHD1L基因在蛋白水平的表达显著高于KYSE150细胞株(P<0.05),差异有统计学意义。(5)siRNA转染实验结果表明:CHD1L-siRNA#4(5’-ACAAACTCTTGCAGCCATT-3’)序列可有效敲低内源性的CHD1L蛋白水平的表达(P<0.01),差异有统计学意义。(6)细胞划痕实验结果表明:与未敲低CHD1L组相比,敲低CHD1L可有效降低食管癌细胞系的迁移能力(P<0.01),差异有统计学意义。(7)细胞增殖实验结果表明:与未敲低CHD1L组及未做任何处理组相比,敲低CHD1L可有效降低食管癌细胞增殖能力(P<0.01),差异有统计学意义。(8)细胞凋亡实验结果表明:与未敲低CHD1L组相比,敲低CHD1L可有效提高食管癌细胞凋亡水平(P<0.01),差异有统计学意义。结论:(1)CHD1L的表达与食管癌有关:CHD1L表达随肿瘤恶性程度增高而增高;而CHD1L的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、肿瘤大体分型均无统计学意义。(2)CHD1L高表达、临床分期、分化程度及淋巴结转移是影响食管癌预后的独立危险因素,可作为判断预后的可靠指标。(3)食管癌患者的年龄、性别、肿瘤大体分型、肿瘤大小、肿瘤病变部位与患者的预后均无统计学意义。(4)人食管癌细胞株EC9706中的CHD1L蛋白表达水平显著高于KYSE150细胞株。EC9706细胞株可作为后续深入功能学研究的良好材料。(5)CHD1L在人食管癌细胞中的高表达可促进肿瘤细胞迁移、增殖能力,抑制凋亡水平,从而为寻找人食管癌的生物学治疗方法提供了有意义的实验依据。