近年来,基于有机小分子荧光探针的荧光成像法由于具有高选择性、高灵敏度和良好的时空分辨率等特点,成为了一种强有力的分析工具,实现了生物体系中活性氧、活性氮和活性硫等活性物质的可视化检测,在生物体的生理病理研究过程中发挥了重要作用。目前大部分荧光探针仅能实现单一物种的检测,但是鉴于生理病理变化过程中多种活性物质同时参与的事实,研制开发可以同时响应两种活性物种的荧光探针则更有意义,无疑会为进一步深入研究相关的分子事件机制提供更有效的信息。过氧亚硝酰自由基（ONOO^–）是一种具有高氧化和硝化能力的活性氮物种,在生物体的各种生理和病理过程中发挥着重要作用。ONOO^–在机体免疫系统中起辅助调节作用的同时也会产生氧化应激损害细胞和组织。生物硫醇通常包括谷胱甘肽（GSH）,半胱氨酸（Cys）和同型半胱氨酸（Hcy）,是细胞内还原状态的关键因素,并且在抗氧化过程中有重要作用。生物硫醇可以作为ONOO^–在细胞内氧化还原信号转导中的优先清除剂。同时,硫化氢（H₂S）具有与生物硫醇类似的特性,在信号转导及调控过程中发挥着重要作用。因此,通过合理设计,借助对探针反应活性或者反应位点的调控,实现细胞内ONOO^–和生物硫醇（包括H₂S）的同时检测,则对于解读细胞内有关ONOO^–/生物硫醇参与的生理病理过程以及分子事件机制具有重要意义。基于以上考量,本论文设计并合成了两个双组分响应小分子荧光探针,用来检测ONOO^–和生物硫醇,具体研究内容如下:（一）合成了同时检测ONOO^–和生物硫醇的荧光探针BCN。BCN以苯并吡喃-香豆素（BC）为荧光母体,通过结构改造,在母体上引入吸电子基团硝基,从而具有两个活性反应位点。BCN可以通过比色法分别检测ONOO^–和生物硫醇,并且可以荧光特异性响应ONOO^–。利用BCN,研究了药物丙烯酰胺（AA）诱导的细胞、小鼠肝脏和脑组织中ONOO^–的含量变化。实验结果表明,AA可以诱导细胞和小鼠肝脏和脑组织中ONOO^–含量的上调。（二）设计合成了双响应荧光探针BCO。BCO在BCN的基础上改变了取代基结构,使其不仅可以比色分析ONOO^–和生物硫醇,还可以对二者进行双通道荧光成像。该探针灵敏度高,反应速度快,可用于细胞成像。研究结果为探究生物体系氧化还原过程中ONOO^–和生物硫醇的相互作用及协同变化提供了良好的分析工具。