鹿茸多肽的设计、合成及其活性研究

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背景和目的:鹿茸作为我国传统的名贵中药材,含有多种促进骨、上皮、血管及神经等组织生长的活性蛋白质及多肽类物质。尽管如此,多肽的分离纯化过程复杂、提取时间长、易失活、消耗原料多、回收率低,限制了鹿茸的药用价值研究和市场推广。本研究采用液相法合成一种鹿茸活性14-肽及其4个肽段,进而评价它们对6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导损伤人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的保护作用,为进一步开发抗帕金森病(PD)的药物提供科学依据和研究思路。方法:(1)采用混合酸酐法合成鹿茸14-肽全长链EP14及其4个肽段(EL5、DL5、EL10和DP9),并经高效液相(HPLC)和电喷雾离子质谱(ESI-MS)技术分析鉴定;(2)以300μmol/L 6-OHDA处理SH-SY5Y细胞构建PD模型组,各保护组以模型组为基础分别加入不同浓度的合成肽段。以CCK-8法检测合成肽段对PD细胞模型的保护作用,Hoechst33258荧光染色及Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术观察合成肽段对PD细胞模型凋亡情况的影响。结果:(1)合理设计并成功合成5条目标肽段;(2)CCK-8及Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测结果显示,与模型组比较,终浓度为200μg/mL DL5、EL10和EP14保护组细胞存活率显著升高且晚期凋亡率显著降低(P<0.05);(3)Hoechst33342染色结果显示,模型组细胞形态不规则,呈致密颗粒状,而DL5、EL10和EP14保护组细胞核固缩和碎裂均有所减少。结论:人工合成的鹿茸肽段DL5、EL10和EP14可以通过抑制6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞凋亡,发挥神经元保护作用。
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