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高胆固醇血症是动脉粥样硬化相关血栓事件发生（心肌梗死、中风等）的重要危险因素。高血脂症患者血小板的活化和聚集能力都显著增强。体外胆固醇负载也能增强血小板的活化能力。胆固醇是脂筏（lipid raft,细胞膜上富含胆固醇和鞘磷脂的膜微区）的重要脂质成分。Lipid raft介导的信号传导参与了血小板的活化与聚集。高胆固醇血症中胆固醇的负载极有可能是通过调节血小板表面的lipid raft来增强其活化能力。但是,血小板的胆固醇水平与lipid raft含量间的关系,以及血小板基础的lipid raft含量对血小板活化的影响都尚不清楚。胆固醇逆转运（reverse cholesterol transport,RCT）是机体排除过多胆固醇的唯一途径。作为RCT中的重要参与者,三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1）介导了细胞胆固醇流入载脂蛋白AI（apolipoprotein AI,apoAI）。ABCA1缺失可增加巨噬细胞表面lipid raft的含量。临床研究发现ABCA1功能缺失病人有凝血障碍。ABCA1基因敲除（knockout,KO）小鼠的生理止血时间也较野生型小鼠更长。但是,ABCA1 KO小鼠的外周血总胆固醇极低且缺乏高密度脂蛋白（high-density lipoprotein,HDL）。因此,血小板上ABCA1对其胆固醇和脂筏的含量以及血小板活化与聚集功能的直接作用亟待阐明。目的:探究胆固醇稳态对血小板脂筏含量及其功能的影响。方法:利用体外孵育MβCD和给予野生型及低密度脂蛋白受体（low-density lipoprotein receptor,LDLr）基因敲除（KO）小鼠高脂饮食来分别减少和增加血小板上胆固醇的水平。通过Cre/Loxp重组技术制备血小板特异性ABCA1基因敲除小鼠并将其回交至LDLr KO背景(ABCA1Pf4-/Pf4-LDLr-/-)。应用PCR扩增和实时定量PCR技术,对小鼠进行基因水平和mRNA水平的表达鉴定。霍乱毒素B（Cholera toxin B,CTB）染色联合流式细胞术检测血小板lipid raft的含量。流式细胞术还被用于检测血小板P-selectin和活化型整合素αⅡbβ3的表达以及磷脂外翻水平。血小板聚集和尾巴出血实验被用于检测体内外血小板的聚集能力。结果:体外移除胆固醇可上调血小板lipid raft的含量（约1.4倍,p<0.001）,而体内胆固醇负载则降低血小板lipid raft的含量（约0.7倍,p<0.01）。ABCA1Pf4-/Pf4-LDLr-/-小鼠血小板中ABCA1的表达仅为对照组小鼠血小板的19%（p<0.001）。ABCA1的缺失也显著地降低了血小板lipid raft的含量（0.83倍,p<0.05）。有趣的是,移除胆固醇增加lipid raft可抑制刺激剂作用下的血小板的活化与聚集（0.1-0.8倍,p<0.01）。与此一致地,负载胆固醇降低lipid raft则增强刺激剂作用下血小板的活化与聚集（1.1-4倍,p<0.01）。相应地,胆固醇负载导致血小板lipid raft含量降低也加速了LDLr KO小鼠血小板的聚集反应（Thrombin 1.3倍,p<0.01;Collagen 1.5倍,p<0.05）,并缩短了LDLr KO小鼠的生理性止血时间（0.64倍,p<0.05）。体外去除体内负载的胆固醇,血小板lipid raft含量和对刺激剂应答的差异也随之消失,这表明体内负载胆固醇确实是通过改变lipid raft来影响血小板的活化与聚集。尽管降低了血小板lipid raft含量,但ABCA1缺失并未增强血小板的活化与聚集。而且,ABCA1Pf4-/Pf4-LDLr-/-小鼠的聚集反应和生理止血时间较对照小鼠都有减缓的趋势。通过移除胆固醇去除lipid raft含量的差异,我们发现ABCA1非胆固醇转运功能的缺失可抑制血小板的活化与聚集（0.79-0.93倍,p<0.05）。结论:胆固醇对血小板上lipid raft的含量及其功能至关重要。类似于胆固醇负载,敲除血小板上ABCA1基因可降低其lipid raft的含量。但是,ABCA1非胆固醇转运功能的缺失对血小板活化与聚集功能的影响却与负载胆固醇完全相反。深入探讨胆固醇稳态对血小板功能的影响及其机制,将为防治心血管类疾病提供全新的靶点与思路。