本试验采用瘤胃尼龙袋技术、体外胃蛋白酶-胰蛋白酶二步酶消化和体外培养技术,研究葡萄糖处理大豆粕对奶牛过瘤胃蛋白、瘤胃发酵参数和小肠可吸收蛋白的影响,为有效利用植物性蛋白,探索新型饲料蛋白质保护剂提供理论依据。试验一:葡萄糖处理大豆粕对奶牛过瘤胃蛋白影响的研究本试验,选取4只体况良好、体重(700±50Kg)、胎次、泌乳期相近的中国荷斯坦奶牛,安装永久性瘤胃瘘管,饲喂蛋白质水平为15.14%,精粗比为47:53的日粮,本章首先设计四部分单因素试验,四部分单因素试验分别为:不同添加量葡萄糖处理大豆粕对奶牛过瘤胃蛋白的影响;不同温度葡萄糖处理大豆粕对奶牛过瘤胃蛋白的影响;不同加热时间葡萄糖处理大豆粕对奶牛过瘤胃蛋白的影响;不同含水量葡萄糖处理大豆粕对奶牛过瘤胃蛋白的影响。然后在单因素试验和前人研究基础上筛选出适宜的因素水平,葡萄糖添加量分别为1%、3%、5%、7%;加热温度分别为85℃、100℃、115℃、130℃;加热时间分别为30min、60min、90min、120min;含水量分别为15%、20%、25%、30%,进行四因素四水平正交试验,共16个处理,用尼龙袋法研究葡萄糖处理大豆粕对奶牛过瘤胃蛋白的影响。结果表明:葡萄糖加热处理大豆粕可有效降低蛋白质降解率,是一种很好过瘤胃保护方法;葡萄糖的添加量范围1%~7%,温度范围85℃~130℃,时间范围30min~120min,含水量15%~30%内处理大豆粕均可有效降低蛋白质的降解率;利用正交试验设计得到,葡萄糖添加量、温度、加热时间、含水量四个因素均对蛋白质降解率影响显著;根据R值得到四个因素的影响顺序为:温度>加热时间>添加量>含水量;随着加热温度、加热时间的延长、葡萄糖添加量的增加,大豆粕DM降解率与瘤胃蛋白降解率都逐渐下降;随着含水量的增加,DM降解率与瘤胃蛋白降解率先降低后增加,含水量20%时保护效果最好。试验二:体外条件下葡萄糖处理大豆粕对奶牛瘤胃参数的影响本试验研究在体外培养条件下,葡萄糖处理豆粕对瘤胃pH、氨氮、微生物蛋白的影响。结果表明:葡萄糖处理组pH在6.28-7.18之间,从处理组与对照组在同一时间的pH变化来看,组间差异不显著(P>0.05);处理组与对照组间氨氮浓度差异极显著(P<0.01),从不同时间点来看,在体外培养2h时,培养液NH3-N浓度均上升至最高点,然后下降,随着培养时间的增加NH3-N浓度有上升的趋势,处理组低于对照组;从不同时间发现各组随着培养时间的增加后微生物蛋白的产量逐渐增加,处理组微生物蛋白产量低于对照组,但除在2h时,两组微生物蛋白含量之间差异极显著(P<0.01),4h两组之间差异显著(P<0.05)外,其余时间点,两组间差异不显著(P>0.05)。试验三:胃蛋白酶-胰蛋白酶体外消化豆粕适宜条件的研究本试验研究得出在恒温摇床下用胃蛋白酶-胰蛋白酶消化豆粕的最适合条件为:在恒温摇床中,温度为37℃,转速85r/min,底物的量为0.5g,缓冲液pH为1.2,胃蛋白酶酶浓度为50mg/mL,锥形瓶中消化6h后,调节消化液的pH至7.5,添加1mL含170mg胰蛋白酶溶液,在39℃恒温摇床中培养18h。试验四:用二步酶消化法对奶牛瘤胃12h残渣的消化本试验为最佳组合的筛选,在试验一和试验三的基础上,用二步酶消化法评定各处理组的瘤胃12h降解残渣,并以可吸收蛋白作为正交的最终结果,极差分析得到最佳的因素水平组合为:添加量3%、温度115℃、加热时间120min、含水量20%。