论文部分内容阅读
本研究以真菌毒素伏马毒素B1(FB1)、黄曲霉毒素B1(AFB1)为研究对象,研制出检测伏马毒素B1、黄曲霉毒素B1的单残留胶体金免疫层析试纸条以及同时检测两种真菌毒素的多残留胶体金免疫层析试纸条。通过优化,确定伏马毒素B1胶体金免疫层析试纸条的最佳工作条件为：胶体金粒径为18 nm；硝酸纤维素膜选择(NC膜)Millipore HF 135s;胶体金标记抗体蛋白最适pH值为7.5,最佳抗体量为30 μg/mL;包被原的最佳包被量为0.07μg／条,金标抗体稀释倍数为1：5；羊抗兔二抗稀释倍数为1：150；包被稀释液为磷酸盐缓冲溶液(PB)；金标垫处理液为PBS缓冲溶液。伏马毒素B1胶体金免疫层析试纸条视觉检测限为5 ng/mL,检测时间小于10 min。方法与其他真菌毒素均没有交叉反应,方法具有很好的特异性。谷物样品的检测限为100 ng/g。通过优化,确定黄曲霉毒素B1胶体金免疫层析试纸条的最佳工作条件为：胶体金粒径为18 nm；硝酸纤维素膜选择Millipore HF 135s;胶体金标记抗体蛋白最适pH值为8.0,最佳抗体量为20 μg/mL;包被原的最佳包被量为0.07μg／条,金标抗体稀释倍数为1：5；羊抗兔二抗稀释倍数为1：130；包被稀释液为PBS缓冲溶液；金标垫处理液为PBS缓冲溶液。黄曲霉毒素B2胶体金免疫层析试纸条视觉检测限为0.5 ng/mL。检测时间小于10 min。方法与其他真菌毒素均没有交叉反应,方法具有很好的特异性。谷物样品的检测限为5 ng/g。通过对伏马毒素B1、黄曲霉毒素B1的多残留胶体金免疫层析试纸条同时检测两种毒素的工作条件的优化,确定最佳工作条件为：伏马毒素金标抗体和黄曲霉毒素金标抗体混合比例为2：1；NC膜划线顺序为质控线、FB1检测线、AFT检测线；样品垫处理液为0.25%Tween-20水溶液,其他工作条件同单残留检测试纸条工作条件。伏马毒素B1、黄曲霉毒素B1的多残留胶体金免疫层析试纸条视觉检测限分别为5 ng/mL、0.5 ng/mL。检测时间小于10 min。谷物样品的检测限分别为96 ng／g和6ng/g。