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【目的】本文通过建立氯化锂匹罗卡品慢性癫痫大鼠模型,给予5-HT6受体拮抗剂SB271046干预,观察大鼠慢性期自发性发作变化。采用WB与RT-PCR方法检测谷氨酸、γ-氨基丁酸合成酶的表达水平;利用高效液相色谱法检测海马组织谷氨酸与γ-氨基丁酸合成酶的含量,探讨5-HT6受体拮抗剂减少痫性发作的可能机制。【方法】1.动物分组:成年雄性SD大鼠分为两组:空白对照组(Vehicle组,n=10),氯化锂-匹罗卡品组(Li Cl-PILO组,n=40)。首先根据注射Li Cl-PILO后是否出现癫痫持续状态(Status Epilepticus,SE),出现SE者纳入实验,未出现SE和死亡者则剔除;然后再随机分组:模型组(EP组)、安慰剂组(EP+DMSO)即侧脑室注射二甲基亚砜(DMSO),4ul;10ug SB-271046药物组(10ug-SB组)即侧脑室注射(SB-271046)剂量为10ug,4ul;20ug SB-271046药物组(20ug-SB组)即侧脑室注射SB-271046剂量为20ug,4ul,30ug SB-271046药物组(30ug-SB组)即侧脑室注射SB-271046剂量为30ug,4ul。2.制作氯化锂匹罗卡品癫痫模型:腹腔注射氯化锂,16-20小时后腹腔注射匹罗卡品,根据Racine分级,发作级数达4级或者4级以上且能持续30min,为造模成功。采用Veliskova和Goffin.K等评分法观察癫痫大鼠慢性期自发性发作。3.药物干预:根据Watson《大鼠脑立体定位图谱》,利用脑立体定位仪在致痫大鼠慢性期给予侧脑室注射DMSO、5-HT6受体拮抗剂SB271046,连续给药3天。给药结束后处死大鼠,收集海马组织标本。4.通过Western Blot(WB)检测海马谷氨酸脱羧酶GAD65、GAD67(Glutamic acid decarboxylase)谷氨酰胺酶GLS(Glutaminase)的变化。5.逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测GAD65、GAD67、GLS m RNA在各组的表达。6.HPLC法测定各组海马组织中谷氨酸、γ-氨基丁酸的含量。【结果】1.氯化锂匹罗卡品慢性癫痫大鼠模型的建立:造模成功率及死亡率:第1批大鼠造模成功率为87.5%,造模后4周存活率为65%;第2批大鼠造模成功率为92.5%,造模后4周存活率为60%;第3批大鼠造模成功率为77.5%,造模后4周存活率为40%。2.5-HT6受体拮抗剂SB271046对致痫大鼠慢性期自发性发作的影响:癫痫大鼠进入慢性期仍有自发性反复的发作,5-HT6受体拮抗剂干预,能够减少慢性期发作的次数以及级数。3.5-HT6受体拮抗剂SB271046对致痫大鼠慢性期海马部位GAD65、GAD67、GLS蛋白水平的影响:(1)与vehicle组相比,EP组GAD65水平降低,SB干预后GAD65水平升高,以20ug-SB组和30ug-SB组明显。(2)与vehicle组相比,EP组GAD67水平降低,SB干预后GAD67水平均有升高。(3)与vehicle组相比,EP组GLS水平升高,SB干预后GLS水平降低,以30ug-SB组明显。4.5-HT6受体拮抗剂SB271046对致痫大鼠慢性期海马部位GAD65、GAD67、GLS m RNA水平的影响:(1)与vehicle组相比,EP组GAD65m RNA水平降低,SB干预后的GAD65水平均升高。(2)与vehicle组相比,EP组GAD67m RNA水平降低,SB干预后的GAD67水平均升高。(3)与vehicle组相比,EP组GLS m RNA水平升高,SB干预后GLS水平降低,以20ug-SB组和30ug-SB组明显。5.5-HT6受体拮抗剂SB271046对致痫大鼠慢性期海马部位GLU、GABA水平的影响:与vehicle组相比,EP组GLU/GABA明显升高,EP组与EP+DMSO组之间无明显差别(p=0.581),与EP组相比,SB干预后GLU/GABA有下降的趋势,EP+10ug SB组(p=0.122),EP+30ug SB组(p=0.081)。【结论】1.5-HT6受体拮抗剂SB-271046可以减少慢性癫痫大鼠自发性发作2.5-HT6受体拮抗剂SB271046可以改善慢性癫痫大鼠谷氨酸脱羧酶(GAD65、GAD67)、谷氨酰胺酶(GLS)异常表达。3.5-HT6受体拮抗剂可能通过改变谷氨酸脱羧酶(GAD65、GAD67)、谷氨酰胺酶(GLS)的表达来调节海马部位γ-氨基丁酸、谷氨酸的水平,从而起到抗癫痫的作用。