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研究背景系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种常见的多器官损害的自身免疫性疾病,几乎所有的患者均有肾脏损害,狼疮肾炎(lupus nephritis,LN)是SLE最常见和最严重的临床表现。SLE和LN的发病机制十分复杂,确切的机理尚不清楚,目前普遍认为SLE是遗传、内分泌因素、环境因素(感染、紫外线照射等)、自身免疫系统异常活化导致发病,此外,炎症也被认为是SLE肾脏损害的关键因素。最近多项研究表明,NLRP3炎症小体参与了SLE的发生、发展。在哺乳动物中,对病原体或者内源性危险信号做出早期固有免疫反应的典型代表是NLRP3炎症小体。NLRP3炎症小体是主要由核苷酸结合结构域和富含亮氨酸重复蛋白3(nucleotide-binding domain and leucine-rich repeat protein 3,NLRP3)、凋亡相关点样蛋白(apoptosis associated speck-like protein,ASC)和半胱氨酸蛋白酶效应器Caspase-1组成的复合体,NLRP3炎症小体形成可以激活Caspase-1,活化的Caspase-1进一步诱导促炎性细胞因子IL-1β和IL-18的成熟和释放,并促进细胞炎性坏死。ROS是NLRP3炎症小体活化其中一个强有力的刺激因素。而近年来多项研究发现,氧化应激同时亦是SLE发病机制的重要因素,合并狼疮肾炎的病人表现出明显的氧化应激状态紊乱。Nrf2作为内源性抗氧化应激的重要调控因子,近年来备受关注。尤其是近年来以Nrf2为治疗靶点的药物已被FDA批准用于复发性多发性硬化病人的临床治疗,对于Nrf2在炎症活动中效应的探讨将会有极大的临床意义。近来的研究提示Nrf2在很多炎症性疾病中有保护作用,如败血症、哮喘、感染性疾病、以及吸烟所致肺气肿等等疾病。然而,Nrf2在狼疮性肾炎中的具体作用及机制至今尚未明确。目的1、探讨SLE患者血清中IL-18、IL-1β的表达及其与疾病活动度、相关临床指标的关联。2、探讨Nrf2调控NLRP3炎症小体在SLE患者PBMC中的作用及其对肾脏内皮细胞的影响。材料和方法1、纳入40例2016年6-12月于广州医科大学附属第二医院风湿免疫科住院的SLE患者(36例女性和4例男性),同时选取性别、年龄匹配的健康对照者30例。所有患者均有完整的临床资料,于清晨空腹抽血留取血清,ELISA检测SLE患者和健康对照者血清IL-1β、IL-18的表达水平。2、提取SLE患者PBMC,预先分别给予Nrf2激动剂、抑制剂组刺激,并予LPS、ATP激发NLRP3炎症通路发生,分别检测各组细胞上清细胞中IL-1β、IL-18的表达,并提取各组PBMC总RNA,用实时荧光定量PCR方法检测PBMC中Nrf2、NLRP3/Caspase-1/IL-1β、IL-18基因表达水平:观察Nrf2是否参与调控NLRP3炎症小体。并在此基础上建立狼疮患者PBMC与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)共培养体系,观察Nrf2调控下各组间细胞活力的变化情况,并与相同刺激条件下单独培养的PBMC、单独培养的HUVEC进行比较。分析共培养体系中NLRP3炎症小体是否参与内皮细胞的损伤,Nrf2是否可通过调控NRLP3炎症小体而对内皮细胞具保护作用。结果一、分析SLE患者血清IL-18、IL-1β的表达及其与疾病活动度、相关临床指标的关联。1、SLE患者血清IL-18、IL-1β浓度均高于健康对照者(p值均<0.001)。2、SLE患者血清IL-18水平与狼疮肾炎、SLEDAI评分、24h尿蛋白正相关,p值均<0.05。3、SLE患者血清IL-1β水平与浆膜炎、狼疮肾炎、SLEDAI评分、ESR、IgM正相关,与C3、Hb、白蛋白、白蛋白/球蛋白负相关,p值均<0.054、SLE患者血清IL-1β水平随SLEDAI评分的升高而上升,不同程度活动期的患者均显著高于稳定期患者(p值分别为0.02、0.007、0.002)二、探讨Nrf2调控NLRP3炎症小体在SLE患者PBMC中的作用及其对肾脏内皮细胞的影响。1、在狼疮患者来源的PBMC中存在NLRP3炎症小体及其下游炎症因子的mRNA水平的高表达,给予Nrf2激动剂预先刺激后,能够减少NLRP3炎症小体及其下游炎症因子的mRNA的表达及炎症因子IL-1β和IL-18的释放;给予Nrf2抑制剂预先刺激后,能够促进NLRP3炎症小体及其下游炎症因子的mRNA的表达及炎症因子IL-1β和IL-18的释放。2、建立PBMC与HUVEC共培养体系,活化NLRP3炎症小体后细胞总体活力下降,给予Nrf2激动剂预先刺激后,细胞总体活力升高,给予Nrf2抑制剂预先刺激后,细胞总体活力下降。同时,与共培养体系相同的条件刺激下,单独培养的PBMC和单独培养的HUVEC各组间细胞活力并没有差异。结论1、SLE患者血清IL-18、IL-1β水平升高,且与疾病活动度及其他能反映SLE病情的多个临床实验室指标相关。2、狼疮患者的PBMC存在NLRP3炎症小体及其下游炎症因子的高表达,可使肾脏内皮细胞生长受抑,Nrf2可能通过调控NLRP3炎症通路而对内皮细胞具保护作用。