苔藓内生菌的分离、鉴定及其代谢产物作用研究

被引量 : 0次 | 上传用户:mddh9666
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
苔藓植物在医药方面的应用已有悠久的历史,并且苔藓植物是植物界的拓荒者之一,国内外文献研究表明苔藓内生菌可作为一种新型微生物资源,并从中获得了一系列结构新颖的具有抗肿瘤和抑菌活性的化合物。本实验针对广西桂林地区20个属的苔藓进行了内生菌的分离工作,首先对内生菌分离方法进行了优化,确立了以表面消毒后充分研磨涂布,并选用PDA培养基或CYM培养基在30℃的培养条件下进行分离为基础的分离方法,共获得237株内生菌。对其中33个表型特征差异较大菌株的菌落和细胞形态进行分析,结果显示该地区苔藓内生菌具有丰富的多样性。随后我们以金黄色葡萄球菌为指示菌筛选得到几株抑菌活性较好的菌株,并进一步探讨了这些菌株在不同碳源、氮源和无机盐培养条件下的生物量及抑菌活性,随后又分析了该地区苔藓中分离的内生菌中代谢产物特征多样性;而后选用典型的革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌和革兰氏阴性菌大肠杆菌为靶标菌进行了活性初筛,得出内生菌1-01、122-02、z12、0409-1和1108-09的抑菌活性最强,并进一步分析了这五株内生菌的抑菌谱,结果显示0409-1和122-02具有广谱的抑菌活性;我们对10株抑菌活性较好的苔藓内生菌进行小规模发酵并制得了粗提液样品,以PC3、MCF-7及HepG-2为靶细胞分析各粗提样品的抗肿瘤效果,结果显示菌株7-6-4和122-02具有较好的抗肿瘤效果。通过本论文工作初步判断苔藓内生菌7-6-4、122-02、1507-7、041721-03、1023-01具备一定的开发潜力,可进行后续活性代谢产物的分离纯化及鉴定工作。本文的主要目的是探索苔藓内生菌的分离方法、苔藓内生菌资源平台的构建及苔藓内生菌中是否有活性代谢物,为研究新型活性天然产物提供新思路。具体内容如下:(1)内生菌分离方法的建立:通过比较紫外线、75%乙醇和稀释一百倍的84消毒液条件,结果显示紫外照射和75%乙醇消毒效果最好,且成本较低,可搭配使用;内生菌释放的最佳方法是充分研磨后涂布;PDA培养基或CYM培养基被证明是适合大部分内生菌生长的营养介质,培养温度确定为30℃。最终我们采用上述优化所得的方法从广西桂林地区20个属的苔藓叶片中分离到共237株内生菌。(2)我们从上述237株苔藓内生菌中选择33个表型特征差异较大的菌株,观察比较其菌落形态和细胞形态,结果显示其具有较高的形态学多样性。随后我们以金黄色葡萄球菌作为指示菌,对各菌株进行抑菌活性初筛,并对其中活性较好的九株内生菌进行了碳源、氮源和无机盐消耗的多样性分析。(3)随后我们采用分子生物学手段结合形态学特征鉴定了六株对金黄色葡萄球菌抑制活性较好的内生菌,结果显示内生菌z12为巨大芽孢杆菌,1-1属于内芽孢菌属,110-02和122-02属于烟曲霉属,122-03属于毛霉菌属,7-6-04属于葡茎根霉菌属。(4)为了寻找苔藓内生菌中的活性物质,选用经金黄色葡萄球菌活性初筛抑菌活性较好的多株内生菌进行代谢产物的TLC和HPLC分析。结果显示苔藓内生菌代谢物种类丰富,不同菌株中含有不同种类的代谢产物。此结论为下一步活性物质的研究打下基础。(5)我们以用大肠杆菌、金黄色葡萄球菌为指示菌,对分离得到的33个表型特征差异较大的菌株进行了抑菌活性初筛,结果显示有11株对大肠杆菌具有不同程度的抑制作用,18株对金黄色葡萄球菌有抑制作用,抑菌效果最好的五株内生菌为1-01、122-02、z12、0409-1、1108-09。随后我们进一步分析了这5株菌的抑菌谱。结果表明122-02、z12、0409-1对多种指示菌都有很好的抑制效果。(6)随后我们对初筛活性较好的10株苔藓内生菌进行小规模发酵并制备了其粗提液样品,并以PC3、MCF-7及HepG-2为靶细胞进行了抑瘤活性实验,结果显示7-6-4和122-02抗肿瘤效果好,其中1507-7、041721-03、1023-01对HepG-2瘤株的抑制效果非常好,因此苔藓内生菌7-6-4、122-02、1507-7、041721-03、1023-01具有一定的开发潜力,可进行后续活性代谢产物的分离纯化及鉴定工作,从而为寻求新型活性天然产物提供了宝贵的资源。
其他文献
本试验以陕西杨凌产水柿为原料,采用常规发酵法和同步发酵法两种方法加工柿果醋。主要研究两种工艺的加工过程中香气物质和7种有机酸的变化,旨在为柿果醋加工过程中的香气物
国外学者近年围绕儿童学习品质的影响因素展开了不少研究,认为影响儿童学习品质的主要因素涉及活动参与、问题行为、年龄和种族等主体因素,父母教养方式、家庭背景特征、学校
用微波光电导衰减仪(μ-PCD)研究了不同温度和时间的磷吸杂处理对铸造法多晶硅片和冶金法多晶硅片少子寿命的影响。实验发现:冶金法多晶硅片吸杂的效果明显优于铸造法多晶硅
NCLB法案培育的"成绩文化"变革着美国K-12课堂教学和教师教育。美国的教师教育项目正承受着NCLB所带来的应试教育之痛:对"高质量教师"的界定使考试成为惟一入职门槛,教师的同
文章基于文化的角度探讨"城市家具"设计的地域特征。以武汉市为例,从楚文化、水文化和码头文化分析了武汉的地域特色,并以此为依托,为该市城市家具的设计提供了一些思路,以求
为了剔除GPS边坡位移监测过程中的噪声干扰,提高监测数据的有效性,特引入随机线性卡尔曼滤波离散数学模型.以水厂铁矿GPS边坡监测数据为依据,利用该数学模型可以计算出各监测
文章分析了中国古代服饰纹样在礼制精神影响下的发展,并结合中国古代礼制文化,从服饰纹样的装饰风格与内容题材、装饰色彩以及装饰形式等方面,阐述了中国古代服饰纹样在礼制
休闲农业是一种发展较快的新型产业。概括了海口市休闲农业的发展现状,指出了海口市休闲农业发展存在的主要问题,最后提出了促进海口市休闲农业转型升级的若干对策。
中国的冰箱行业经过三十年的迅猛发展,已经成为成熟的行业,竞争激烈。企业在这么激烈的环境里生存,必须保持对市场的高度敏感,适时调整自己的各项操作,包括渠道营销模式,以上
随着我国金融改革的不断深化,民营银行存在的必要性日渐凸显。中国近代民营银行曾辉煌一时,不论是在数量上还是在资本实力上都在当时银行界占据主导地位。在短短五十余年的经