伏马毒素和氯霉素免疫亲和检测柱的研究

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论文采用一种免疫亲和凝胶柱对食品中伏马毒素B1(FB1)和氯霉素(CAP)残留的检测进行了系统研究,用溴化氢活化的琼脂糖凝胶偶联伏马毒素抗体或氯霉素抗体制备其分别的抗体胶;偶联辣根过氧化氢酶(HRP)抗体制备其HRP胶;将溴化氢活化的琼脂糖凝胶封闭制备封闭胶。封闭胶与抗体胶混合制备成检测层,与HRP胶混合制备成对照层,装入检测柱,并对影响实验的各个因素(离子强度,pH值等)进行了优化,建立了一种省时、灵敏度高、可视化的检测方法,可以定性半定量的检测食品中的伏马毒素和氯霉素。对于伏马毒素B1免疫亲和凝胶检测柱:封闭胶与抗体胶以1:10比例混合可以达到良好的视觉显色结果,封闭胶与抗体胶1:90混合制备其对照层,其FB1-HRP以1:8000稀释用于凝胶检测柱的检测,建立伏马毒素免疫亲和凝胶检测柱的最低限量检测限(LOD)为40μg/L。对啤酒、白酒、玉米粉、谷物牛奶中伏马毒素残留进行了检测:啤酒和白酒直接稀释5倍;玉米粉加入PBS提取离心后稀释5倍;谷物牛奶离心取上层溶液稀释10倍。对于氯霉素免疫亲和凝胶检测柱:封闭胶与抗体胶以1:20比例混合是可以达到良好的视觉显色结果,封闭胶与抗体胶1:100混合制备其对照层,其CAP-HRP以1:20万稀释用于凝胶检测柱的检测,建立氯霉素免疫亲和凝胶检测柱的LOD为1μg/L。对牛奶、乳粉、鱼塘水、蜂蜜中氯霉素的残留进行了检测;牛奶和鱼塘水可以直接进行检测;乳粉5倍加入PBS溶解;蜂蜜5倍稀释。该免疫亲和凝胶柱检测食品样品不需要任何有机溶剂和复杂的前处理,及大型仪器的辅助,添加3个不同浓度的伏马毒素(氯霉素)标品,用ELISA方法进行了验证,检测结果一致,表明试验所建立的方法具有很好的准确性,满足快速检测的要求。
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