假单胞菌(Pseudomonas)芳香族化合物降解基因的研究

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从鱼类致病菌中分离到一株菌株,根据其个体形态,生理生化特性,进行了分类研究,确定此菌株为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)PF01。其耐热特性(43℃仍然能生长)以及能利用甘油为唯一碳源和能源来源,与标准模式菌株不同。该菌株产生的荧光色素水溶液在325nm波长的紫外区有最大的光吸收值。 将荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)PF01和本室保存的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)ATCC27853进行了一系列芳香族化合物利用实验。结果表明,两种菌都能在以苯甲酸钠为唯一碳源的基础培养基上生长,并且,对苯甲酸钠的耐受性分别达到1.7%和1.6%;两种菌都能以适当浓度的苯,甲苯,二甲苯,苯酚,苯甲醇为唯一碳源生长;荧光假单胞菌能以二苯胺,对二甲氨基苯甲醛,3,5-二硝基水扬酸为唯一氮源生长;铜绿假单胞菌能以3,5-二硝基水扬酸,对二甲氨基苯甲醛为唯一氮源生长。 以铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)ATCC27853和荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)PF01的染色体DNA为模板,通过PCR扩增方法,分别获得两种菌编码苯甲酸盐降解酶系ben基因区的一段特异扩增主带。分离纯化后,与用SmalⅠ酶消化的质粒载体pBluescript SK+,通过T4 DNA连接酶平端连接,高频转化法转化大肠杆菌(E.coli)XL1—Blue。经α-互补试验筛选出阳性重组菌落,通过对重组菌株的质粒分离纯化,限制性酶EcoRⅠ,PstⅠ单酶消化,EcoRⅠ+BamHⅠ双酶消化,PCR反应等一系列鉴定试验,表明克隆菌株pSPL—0,pSPL—1,分别带有铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)ATCC27853 ben基因区的PCR扩增片段;克隆菌株pSPY—0,pSPY—1分别带有荧光假单胞菌(Psedomonas fluorescens)PF01的PCR异源扩增片段。
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