Lunasin是一种大豆生物活性肽,具有抗氧化,抗炎、抗癌及降低体内胆固醇等生物活性。但Lunasin在大豆中含量较低,约为0.5～1.2 mg/g,且提取纯化复杂,使得Lunasin在工业化生产及商业化利用难以实现。本论文从大豆发芽积累Lunasin的影响因素、Lunasin功能活性以及Lunasin肽在谷子中表达三方面进行研究,以期为Lunasin的生产应用奠定基础。首先,研究了在大豆发芽过程中,发芽温度、发芽时间以及Na Cl的浓度对Lunasin积累的影响。采用Western blot和酶联免疫对豆芽中Lunasin含量进行测定。结果表明,Na Cl胁迫大豆发芽Lunasin积累最佳条件为:Na Cl浓度为50 m M,发芽时间为6 h,发芽温度为25℃,在此条件下豆芽中Lunasin含量为2.34 mg/g。其次,研究了Lunasin肽的生物活性。(1)采用ABTS和DPPH自由基清除实验评价Lunasin纯提物的抗氧化活性。结果表明,在浓度0.125～1 mg/m L范围内,未发芽组、水处理组和盐处理组的自由基清除活性均呈剂量依赖性关系,盐处理组的自由基清除活性显著高于水处理组和未发芽组。(2)在小鼠RAW264.7巨噬细胞NO测定中,盐处理组、水处理组和未发芽组均显著抑制NO在培养基中的积累,且呈剂量依赖关系。当浓度为2 mg/m L时,盐处理组的抑制率(70.2%)明显高于水处理组(58.4%)和未发芽组(51.9%)。此外,Lunasin纯提物能抑制脂多糖诱导一氧化氮合酶(NOS)、白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因的表达,抑制作用:盐处理组>水处理组。(3)测定了Lunasin对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的毒性作用和抗增殖作用。细胞毒性实验结果表明,未发芽组、水处理组和盐处理在0.5～2 mg/m L浓度范围内对MDA-MB-231细胞无细胞毒作用。在抗增殖实验中,未发芽组、水处理组和盐处理组对MDA-MB-231细胞的增殖均有较高的抑制作用。在2 mg/m L浓度下,盐处理组对细胞增殖的抑制率(69%)明显高于水处理组(52%)和未发芽组(37%)。最后,以谷子为植物表达系统,外源表达Lunasin肽并对其生物学活性进行了表征。采用农杆菌介导转化法,获得Lunasin谷子转基因植株,Western-blot结果表明,Lunasin肽在转基因谷子中成功表达。ABTS和DPPH自由基清除活性检测显示转基因型(转Lunasin谷子中Lunasin肽富集物)的清除自由基能力显著高于野生型(野生型谷子中多肽富集物)。Lunasin降脂活性分析表明,相比于野生型,转基因型能够更好的抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,减少分化过程中油脂的堆积。同时,转基因型对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的抑制率也高于野生型。