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通过抑制性消减杂交获得的籽鹅卵巢组织差异表达的5个产蛋性能相关基因,为进一步验证消减杂交的结果,并确定这些基因与产蛋性能的相关程度。从26个ESTs中挑选了5个作为研究对象,试验材料选用产蛋前期5月龄和产蛋期8月龄的籽鹅卵巢组织,用Trizol法获得两个月龄卵巢中的总RNA,反转录为cDNA,用RT-PCR方法分别扩增出5个基因的表达序列标签目的片段,利用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法分析其在籽鹅产蛋前期与产蛋期卵巢组织中的mRNA表达水平;对其中4个定量试验中得到的ESTs序列的片段再次比对分析,设计长序列的引物,采用普通PCR的方法,将短片段的基因扩长,进行序列分析;对登录号为GE616652的EST利用5’-RACE技术扩增其5’端基因序列,获得该基因的全长CDS序列,对其进行生物信息学分析,预测其氨基酸的性质和生物功能。具体结果如下:(1)EST4,EST5,EST6,EST8的产蛋期mRNA相对表达量高于产前期,差异显著(P<0.05),EST7的产蛋期mRNA相对表达量高于产蛋前期,差异极显著(P<0.01)。EST4基因mRNA的相对表达量产蛋期是产蛋前期的10.36倍,EST5为3.54倍,EST6为4.35倍,EST7为3.06倍,EST8为4.64倍。(2)EST4 ,EST5 ,EST7, EST8分别扩增至537bp, 866bp, 818bp, 916bp。获得了与EST相对应的籽鹅卵巢组织的RPL10A、ATP5A1、RNF130部分编码区序列,得到OAZ1的完整CDS区。(3)获得了籽鹅SDC2基因的全长CDS区序列,ORF长度为606bp,编码201个核苷酸,等电点4.53,相对分子量22kDa。构建了发育树与多重序列比较,确定了籽鹅SDC2属于多聚体蛋白聚糖家族成员之一,该基因在物种进化过程高度保守,并与胚胎发育及相关的生长因子有关。本研究验证了使用SSH技术和斑点杂交的试验结果,籽鹅卵巢中该5个EST产蛋期的mRNA相对表达均高于产蛋前期。对于这5个EST进行长片段克隆和分子生物学分析,并对籽鹅SDC2的氨基酸性质和功能做了初步推断。