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苏丹红Ⅰ（SudanⅠ）是一种偶氮类脂溶性化工染料，由于其染色鲜艳，不易褪色，曾被作为食品添加剂使用，后经研究表明SudanⅠ在降解中会产生有毒性的苯胺和萘酚，属于可疑致癌物，为此，我国及欧盟等严令禁止其在食品工业中使用。但是由于SudanⅠ的成本低，着色效果好，仍有一些生产厂家非法使用，导致了一系列“苏丹红事件”，所以加强检测非常必要。目前SudanⅠ的检测方法存在仪器化程度高，检测成本高，难于推广等缺点，因此，迫切需要建立一些经济、简便和快速的检测方法。本文首先采用琥珀酸酐法对SudanⅠ进行了改造，获得了其衍生物苏丹红Ⅰ半琥珀酸酯（SudanⅠhemisuccinate，SudanⅠ-HS），然后采用活性酯法将SudanⅠ-HS与载体蛋白连接，获得SudanⅠ人工抗原，制备了抗SudanⅠ抗体，建立了间接竞争ELISA，并分析了辣椒粉中SudanⅠ的残留。具体内容包括以下。1 SudanⅠ人工抗原的构建SudanⅠ分子量为248.28，属于只有反应原性而无免疫原性的半抗原（hapten），必须与蛋白质等载体结合转化为完全抗原才能刺激动物产生抗体。根据SudanⅠ具有酚羟基的结构特点，采用琥珀酸酐法合成了SudanⅠ的衍生物SudanⅠ-HS，并采用红外光谱与液质联用对SudanⅠ-HS进行了分析。在此基础上，采用活性酯法将SudanⅠ-HS分别与牛血清白蛋白（Bovine serum albumin，BSA）和卵清蛋白（Ovalbumin，OVA）偶联制备得到SudanⅠ-HS-BSA和SudanⅠ-HS-OVA，SudanⅠ-HS与载体蛋白的偶联比分别为11∶1和5∶1。2 SudanⅠ抗血清制备及其ELISA的建立将SudanⅠ-HS-BSA以多点、多次注射的方法免疫BALB／c小鼠。对抗体的产生进程分析发现，从第25d开始有明显抗体产生，第70d达到高峰，然后开始下降，抗体的ELISA效价最高达1∶32000。以上述制备的抗原和抗体为材料，通过对包被条件、抗原抗体反应条件等的研究，优化得到了SudanⅠ的竞争ELISA条件为：SudanⅠ-HS-OVA用0.05mol／mL pH9.6的碳酸盐缓冲液在4℃包被12h，包被浓度为5μg／mL，抗体以pH7.4的PBST缓冲液稀释为1∶4000，竞争抗原与抗体混匀37℃反应1h后，加入酶标板中再反应1h，然后加入酶标二抗（以PBST作1∶1000稀释）37℃反应1h，加底物37℃反应20min，用2mol／L H2SO4终止反应，测定OD490。根据上述竞争ELISA条件，以竞争抗原SudanⅠ的浓度对数为横坐标，竞争抑制率为纵坐标，作图得到SudanⅠ的抑制曲线，曲线方程y=—12.462x+78.816，R2=0.9808，此时，SudanⅠ的半数抑制浓度(IC50)为0.205μg／mL，线性检测范围为0.01-10μg／mL。同时以SudanⅡ、Ⅲ和Ⅳ为竞争抗原分析了SudanⅠ抗体的特异性，它们的交叉反应率分别为0.23％、0.06％和0.01％，表现出很好的特异性。3 SudanⅠ的加标回收在经HPLC确证不含SudanⅠ的空白辣椒粉样品中分别添加不同浓度（0.05-10μg／g）的SudanⅠ，以竞争ELISA分析加标回收，同时以HPLC作对照。结果表明：SudanⅠ的ELISA平均添加回收率为87.96-110.53％，变异系数为2.48-11.93％；HPLC的平均添加回收率为90.27-101.36％，变异系数为2.70-5.83％，两种方法的分析结果相关性较好。