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研究目的：研究粘附分子E-cadherin和Desmoglein-2在肝细胞性肝癌(Hepatocellu-lar Carcinoma, HCC)患者中的甲基化状态,探讨E-cadherin和Desmoglein-2基因DNA甲基化是否是HCC的发病机制之一,能否作为基因治疗的靶点之一。研究内容和方法：1、采用甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation specific polymerase chain reaction MSP)技术,检测2008年10月～2013年12月收集的40例HCC患者肝癌组织(实验组)及其癌旁非瘤组织(对照组)和7例正常肝脏组织的E-cadherin基因和Desmoglein-2基因启动子甲基化发生率；并与患者的年龄、性别、肝炎、饮酒、抽烟等临床特征进行相关性分析,并对两基因的相互关系进行分析。2、培养人原发性肝癌细胞株HepG2、Huh7、SMMC7721、QGY7701和正常肝细胞株HL7702,检测]E-cadherin和Desmoglein-2基因DNA甲基化情况。3、培养人原发性肝癌细胞株HepG2、Huh7、SMMC7721、QGY7701,分别用Oμmol/L(空白对照组)和10μmol/L(实验组)的5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-2-deoxycytidine,5-Aza-dc)去甲基化干预细胞72小时,提取实验组和对照组细胞DNA和RNA,检测E-cadherin基因DNA启动子甲基化改变情况,并采用实时定量聚合酶链反应(Quantitative real-time polymerase chain reaction QRT-PCR)技术检测E-cadherin基因mRNA表达改变情况。实验结果：1、HCC患者中E-cadherin和Desmoglein-2基因启动子甲基化：①E-cadherin基因启动子甲基化阳性率在实验组和对照组分别为37.5%(15／40)和0%(0／40),两组比较有显著性差异(P<0.01);②Desmoglein-2基因启动子甲基化阳性率在实验组和对照组分别为7.5%(3／40)和2.5%(1／40),两组比较,差异无统计学意义(P>0.05);③7例正常肝脏组织中E-cadherin和Des-moglein-2基因启动子甲基化均为0%(0/7)。2、比较年龄≥50岁和<50岁的HCC患者E-cadherin基因启动子甲基化阳性率以及男性和女性HCC患者E-cadherin基因启动子甲基化阳性率,差异均无统计学意义(P>0.05)；比较肝炎、饮酒和抽烟的HCC患者E-cadherin基因启动子甲基化阳性率,差异均有统计学意义(P<0.05),相关性研究显示,E-cadherin基因启动子甲基化阳性率与肝炎、饮酒和抽烟史呈正相关(r值分别为0.431,0.332,0.372,P<0.05)。3、HCC患者中E-cadherin基因启动子甲基化和Desmoglein-2启动子甲基化无明显相关性(P=0.279>0.05)。4、肝癌细胞株中E-cadherin和Desmoglein-2基因启动子甲基化①肝癌细胞株HepG2、Huh7、SMMC7721、QGY7701中E-cadherin和Desmoglein-2基因启动子均发生DNA甲基化。②正常肝细胞株HL7702中未发生甲基化。5、肝癌细胞株HepG2、Huh7、SMMC7721、QGY7701,分别用Opmol/L(对照组)和10μmol/L(实验组)5-Aza-dc去甲基化干预72小时后,与对照组比较,实验组DNA中E-cadherin基因启动子甲基化水平降低,E-cadherin基因mRNA表达量升高。E-cadherin基因mRNA表达和E-cadherin基因启动子非甲基化状态存在正相关(r=0.707,P<0.05),即与E-cadherin基因启动子甲基化状态存在负相关。结论：1、HCC患者E-cadherin基因DNA启动子甲基化率明显升高,E-cadherin基因启动子甲基化率与患者肝炎、饮酒和抽烟史呈正相关,E-cadherin基因启动子甲基化可能是HCC的早期分子事件。HCC患者Desmoglein-2基因启动子存在甲基化,但甲基化阳性率不高。2、E-cadherin基因启动子甲基化和Desmoglein-2基因启动子甲基化无相关性。3、5-Aza-dc干预肝癌细胞株后,E-cadherin基因启动子甲基化率降低,mRNA表达量升高,提示E-cadherin基因启动子甲基化率与其mRNA表达量呈负相关,反向验证E-cadherin基因甲基化情况与MSP结果一致。