【摘 要】
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目的:探明小豆蔻明(Cardamonin,CAR)通过降低Raptor蛋白的表达诱导氧化应激抑制卵巢癌细胞增殖和迁移的作用及作用机制。方法:1细胞培养:人卵巢癌SKOV3细胞株、经CRISPR-Cas9技术敲除Raptor的SKOV3细胞株和人卵巢癌A2780细胞株分别以含10%胎牛血清(FBS)、1%青霉素-链霉素的Mc Coy’s 5A和1640培养基培养,培养条件为37℃、5%CO2恒温培养
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目的:探明小豆蔻明（Cardamonin,CAR）通过降低Raptor蛋白的表达诱导氧化应激抑制卵巢癌细胞增殖和迁移的作用及作用机制。方法:1细胞培养:人卵巢癌SKOV3细胞株、经CRISPR-Cas9技术敲除Raptor的SKOV3细胞株和人卵巢癌A2780细胞株分别以含10%胎牛血清（FBS）、1%青霉素-链霉素的Mc Coy’s 5A和1640培养基培养,培养条件为37℃、5%CO2恒温培养箱。2检测方法与指标2.1流式细胞术检测细胞内ROS含量;2.2 CCK8检测细胞活力;2.3划痕实验观察细胞迁移能力;2.4质谱法检测细胞内蛋白含量;2.5 Western blotting法检测细胞内S6K1、p-S6K1、mTOR、p-mTOR、ERK1/2、p-ERK1/2、Raptor、β-Actin蛋白的表达。结果:1.CAR能够诱导ROS生成,抑制卵巢癌SKOV3和A2780细胞的增殖和迁移;活性氧清除剂NAC能够降低CAR对卵巢癌细胞增殖和迁移的抑制作用;2.CAR对MAPK信号通路有显著影响,并且会抑制p-ERK1/2表达,但不影响其总蛋白表达;3.CAR抑制p-mTOR及其下游p-S6K1表达,mTOR激动剂MHY1485预处理能够拮抗CAR对mTOR及其下游底物S6K1的磷酸化抑制作用;4.Raptor敲除SKOV3细胞Raptor的蛋白表达显著性降低;与野生型细胞相比,Raptor敲除细胞ROS生成增加,细胞活力和迁移能力明显降低;5.CAR能够显著降低p-mTOR、Raptor、p-S6K1及p-ERK1/2蛋白表达;Raptor敲除后,CAR对p-ERK1/2、p-mTOR、p-S6K1的抑制作用减弱。结论:1 CAR诱导细胞氧化应激抑制卵巢癌细胞的增殖与迁移;2 Raptor介导CAR抑制ERK1/2、mTORC1诱导细胞氧化应激作用。
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