食品中真菌毒素的电化学检测方法研究

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真菌毒素是真菌在食品或饲料里生长所产生的一类有毒的次级代谢产物,能够对食品造成严重的污染,现在已经成为了威胁全球食品安全的主要因素之一。真菌毒素不仅可以直接污染粮谷类农产品,如玉米、小麦、大麦、花生、燕麦、水稻和饲料等;而且能够通过食物链间接污染动物性食品,如牛奶、肉类以及蛋类。被污染的食品,不仅其自身的营养价值大打折扣,甚至还会给人类与动物的健康和生命带来巨大的威胁。因此,发展简便高效、准确可靠的真菌毒素的检测方法是预防和解决食品污染问题的一个重要途径。鉴于电致化学发光(ECL)分析法具备灵敏度高、准确度高、设备简单以及分析速度快等优点,科研工作者们开发了各式各样的传感器用于真菌毒素的快速分析与灵敏检测。本论文通过设计一种新型的ECL适配体传感器,实现了对赭曲霉毒素A(OTA)的高灵敏度和高准确度检测。本论文的主要内容如下:我们利用DNA行走机器人能够显著放大检测信号的优良特性,构建了一种简单灵敏的ECL适配体传感器用于OTA浓度的检测。DNA行走机器人是一种人工合成的、简便实用的信号放大技术,其通过设计几条特定的DNA链并利用DNA步行链(DNA walker)的定向自主运动来达到提高检测灵敏度的目的。本方案中,作为ECL信号发射器的硫化镉量子点(CdS QDs)通过物理吸附作用修饰在电极表面。当在CdS QDs表面修饰DNA之后,仪器检测到的响应信号强度很微弱,这是由于花氰染料5(Cy5)标记的DNA即Cy5-DNA能够通过电致化学发光共振能量转移(ERET)有效地猝灭CdS QDs的ECL信号。加入OTA之后,DNA walker能够与Cy5-DNA自主进行链杂交反应;在核酸内切酶的帮助下,Cy5-DNA被切割并从电极表面释放,由于DNA walker能够循环多次地与电极表面的Cy5-DNA进行杂交,导致大量的Cy5-DNA被核酸内切酶切割进而远离电极表面,所以仪器检测到的ECL信号显著增大。因此,可以通过监测恢复后的ECL信号来实现对OTA浓度的定量检测。在最佳的实验条件下,本实验所制备的适配体传感器用于检测OTA不仅在0.05 nM到5 nM范围内呈现良好的线性关系,检出限为12 pM(S/N=3),而且对于OTA表现出优良的选择性。更重要的是,本方法已经成功地应用于葡萄酒和啤酒中OTA的含量分析,对于预防和解决食品污染问题具有重要意义。
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