仁术健脾理气方对功能性消化不良大鼠的治疗作用及其机制研究

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目的:探讨仁术健脾理气方对功能性消化不良(functional dyspepsia, FD)大鼠的治疗作用及机制。方法:将10日龄雄性SPF级Sprague-Dawley幼鼠130只随机分为正常组和造模组两组。采用0.1%碘乙酰胺(iodoacetamide, IA)灌胃联合夹尾刺激法诱导大鼠FD脾虚气滞型模型。待大鼠8周龄时进行模型评定,将造模成功的大鼠再随机分为模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、阳性药组5组。正常组和模型组均给予0.9%的氯化钠溶液1 ml/100g灌胃,中药低、中、高剂量组分别给予生药含量为0.4775g/ml、0.9555g/ml、1.9110g/ml的中药煎剂lml/100g灌胃,阳性药组予以0.0003g/ml的多潘立酮溶液lml/100g灌胃。采用苏木素-伊红(Hematoxin eosin, HE)染色法显微镜下观察大鼠胃组织病理改变。采用放射免疫技术检测大鼠胃组织髓过氧化物酶(MPO)活性。采用酶联免疫法检测大鼠血清胃动素(MTL)、胃泌素(GAS)、胃促生长素(Ghrelin)、血清素(5-HT)以及降钙素基因相关肽(CGRP)含量的变化。采用PowerLab生物机能信号采集分析处理系统记录大鼠离体胃体纵行平滑肌条的收缩活动变化。采用实时荧光聚合酶链反应法(Real-time PCR)、蛋白免疫印记法(Western Blot)和免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)技术检测5-HT4R在大鼠胃体纵行平滑肌条的表达水平。结果:1大鼠造模期间体重的变化:从幼鼠IA灌胃第3天到第6天,造模组幼鼠体重增长率明显低于正常组(P<0.05);从大鼠7周龄夹尾刺激第4天到第7天,造模组大鼠体重增长率明显低于正常组(P<0.01,P<0.05)。2大鼠造模期间胃组织MPO活性的变化:在幼鼠IA造模后第1天和大鼠8周龄时,正常组和造模组大鼠胃组织MPO活性相比较差异无统计学意义(P>0.05)。3大鼠造模期间胃粘膜的变化:幼鼠IA灌胃造模后第1天,造模组幼鼠胃粘膜腺体排列正常,腺体表面仅可见到少量慢性炎细胞浸润,余未见异常大鼠8周龄时,造模组大鼠胃组织形态未见任何病理改变。4大鼠造模后胃排空功能的变化:大鼠8周龄时,造模组大鼠3小时摄食量、胃排空率显著低于正常组(P<0.05),3小时后胃内食物残余量则显著高于正常组(P<0.05)。5大鼠给药期间体重的变化:给药期间,各组大鼠体重均呈增长趋势,模型组大鼠体重增长较其它各组缓慢,在给药第6天和第7天时,模型组大鼠体重增长率显著低于正常组(P<0.01)。在给药第7天时,中药各剂量组和阳性药组大鼠体重增长率均显著高于模型组(P<0.05),中药各剂量组和阳性药组大鼠体重增长率相比较差异无统计学意义(P>0.05)。6大鼠给药后胃排空功能的变化:模型组大鼠3小时摄食量、胃排空率显著低于正常组(P<0.05),3小时后胃内食物残余量则显著高于正常组(P<0.05)。与模型组比较,中药高剂量组与阳性药组大鼠3小时摄食量、胃排空率均明显增加(P<0.05),3小时后胃内食物残余量则明显减少(P<0.05);中药低、中剂量组大鼠3小时摄食量和模型组比较差异无统计学意义(P>0.05),3小时后胃内食物残余量明显低于模型组(P<0.05),胃排空率明显高于模型组(P<0.05)。中药各剂量组间比较以及中药各剂量组与阳性药组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。7大鼠给药后血清MTL, GAS, Ghrelin,5-HT, CGRP含量的变化:模型组大鼠血清中MTL,GAS,Ghrelin和5-HT含量明显低于正常组(P<0.01,P<0.05);仁术健脾理气方各剂量组和阳性药组均可不程度地升高FD大鼠血清中MTL,GAS. Ghrelin和5-HT的含量(P<0.05,P<0.01),且高剂量组与阳性药组作用比较无显著性差异(P>0.05)。与正常组比较,模型组大鼠血清CGRP的含量显著升高(P<0.05);仁术健脾理气方各剂量组和阳性药组均可不程度地降低FD大鼠血清中CGRP的含量(P<0.05),且中药高剂量组和阳性药组作用相比较差异无统计学意义(P>0.05)。8大鼠给药后离体胃体纵行平滑肌条收缩反应的变化:模型组大鼠离体胃体纵行平滑肌条收缩的平均频率和振幅变化率显著低于正常组(P<0.01)。与模型组比较,中药组大鼠离体胃体纵行平滑肌条收缩的平均频率和振幅变化率显著增高(P<0.01)。9大鼠给药后胃体纵行平滑肌条5-HT4R蛋白表达水平的变化:①IHC检测结果显示:与正常组比较,模型组大鼠胃体纵行平滑肌条5-HT4R棕黄色阳性表达量显著降低(P<0.01)。与模型组比较,中药组大鼠胃体纵行平滑肌条5-HT4R表达量显著增加(P<0.01)。②WB检测结果显示:模型组大鼠胃体纵行平滑肌条5-HT4R蛋白的表达水平显著低于正常组(P<0.01),中药组大鼠胃体纵行平滑肌条5-H%R蛋白的表达水平显著高于模型组(P<0.01),中药组和正常组相比较无显著性差异(P>0.05)。10大鼠给药后胃体纵行平滑肌条5-HT4R mRNA表达水平的变化:RT-PCR检测结果显示:模型组大鼠5-HT4R mRNA在胃体纵行平滑肌条的表达显著低于正常组(P<0.01),中药组大鼠5-HT4R mRNA在胃体纵行平滑肌条的表达显著高于模型组(P<0.01),中药组和正常组相比较无显著性差异(P>0.05)。结论:1仁术健脾理气方能够提高FD大鼠3小时摄食量和胃排空率,减少3小时胃内食物残余量,增加FD大鼠体重,促进FD大鼠离体胃体纵行平滑肌条的收缩活动,对IA灌胃联合夹尾刺激法诱导的脾虚气滞型FD大鼠具有促进胃排空的作用。2仁术健脾理气方促进FD大鼠胃排空的作用机制可能与其提高FD大鼠血清MTL, GAS, Ghrelin,5-HT含量,降低血清CGRP含量,上调5-HT4R mRNA和蛋白表达有关。平滑肌收缩5-HT4R
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