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目的:纳入射血分数保留心力衰竭相关肺动脉高压(pulmonary hypertension due to heart failure with preserved ejection fraction,PHHFp EF)与非左心疾病导致的肺动脉高压(pulmonary hypertensionnon-left heart disease,PH-non-LHD)患者,探讨其临床、超声心动图与血流动力学特征。方法:根据PH的临床分组、病史、实验室检查、超声心动图、结合纳入和排除标准,纳入2021年1月至2021年6月在重庆医科大学附属第一医院就诊且符合研究标准的患者。通过超声心动图和右心导管术(right heart catheterization,RHC),检测心脏结构、功能及血流动力学特征。结果:经纳入、排除标准筛选,本研究最终纳入46例患者(PHHFp EF,n=19;PH-non-LHD,n=27),其中PH-HFp EF(n=7)、PH-nonLHD(n=14)行RHC。超声心动图结果显示:与PH-non-LHD相比,PH-HFp EF组患者RA、LA、LVEF无显著性差异;RV(22 vs 24(P=0.048))、PASP(47 vs 77(P=0.048))显著降低,LVIDd(46 vs42(P=0.008))、LVIDs(33 vs 29(P=0.005))、E/e’(11.4 vs 6.5(P<0.001))、TAPSE(17.7 vs 13.6(P=0.002))显著增高。上述结果提示,与PH-non-LHD组相比,PH-HFp EF组患者肺动脉压力显著降低,左室舒张功能相对较差,但右室功能相对较好。RHC结果显示:与PH-non-LHD组相比,PH-HFp EF组PAWP显著增高,SVC、RA、RVP、PAP、CO、PVR有降低趋势但无统计学差异。血气分析结果显示:与PH-non-LHD组相比,PH-HFp EF组SVC、RV、RA、PA氧饱和度有降低趋势但无统计学差异。上述结果提示,PH-HFp EF组患者肺动脉及右心压力呈降低趋势,而PAWP显著增高提示左心功能障碍更严重。结论:PH-HFp EF患者肺动脉压力相对较低,右心功能障碍较轻,且左心功能舒张障碍严重。目的:建立HFp EF动物模型,探索ARNI在PH-HFp EF中的作用及机制。方法:通过微创横主动脉弓缩窄手术,构建MTAC/DOCA的HFp EF小鼠模型,并用ARNI治疗HFp EF小鼠。使用小动物超声心动图评估其心脏结构与功能、肺动脉功能。HE染色检测肺动脉组织细胞形态,IHC、Western Blot检测Cyclin D1、PCNA、PKG、α-SMA蛋白表达。结果:(1)超声心动图、生理数据测量结果显示:与Sham组相比,MTAC/DOCA(HFp EF)小鼠主动脉峰值血流流速显著增加,LVEF未降低,HW/TL、RV/(LV+S)、E/e’、LVIDd、LVIDs、LVEDV、LVESV、IVSd显著增高。上述结果提示,MTAC/DOCA小鼠左室收缩功能保留且舒张功能受损且右室肥厚,提示HFp EF小鼠造模成功。(2)ELISA结果显示:与Sham组相比,HFp EF组血清ANP、BNP水平显著升高,c GMP水平显著下降。与HFp EF组相比,HFp EF+ARNI组血清ANP、BNP水平显著下降,c GMP水平显著升高。上述结果提示,ARNI能显著改善HFp EF小鼠的血压和利钠肽水平。(3)超声心动图结果显示:与HFp EF组相比,HFp EF+ARNI组E/e’比值和LVIDd显著降低,LVIDs呈降低趋势。上述结果提示,HFp EF小鼠左心舒张功能受损且收缩功能正常,给予ARNI治疗能有效改善左心室舒张功能。与Sham组相比,HFp EF组PA峰值血流流速显著增快,平均肺动脉压力(mean pulmonary artery pressure,m PAP)显著增高;同时,HFp EF组肺动脉加速时间(pulmonary artery accelerate time,PAAT)、PAAT/PAT和三尖瓣环收缩期位移(tricuspid annular plane systolic excursion,TAPSE)显著降低;与HFp EF组相比,HFp EF+ARNI组PA峰值血流流速显著减慢,m PAP显著降低;同时PAAT时间显著延长,PAAT/PAT和TAPSE显著增高。血流动力学与右室肥厚指数RV/(LV+S)结果显示:与Sham组相比,HFp EF组RVSP、RV/(LV+S)显著增高,在给予ARNI干预之后RVSP、RV/(LV+S)显著降低。上述结果提示,HFp EF组小鼠肺动脉压力增高且右心室肥厚、右心室功能障碍,ARNI能有效降低其肺动脉压力,改善右心功能,减轻右心室肥厚。(4)HE染色结果显示:与Sham组相比,HFp EF组中膜面积(media area)显著增加(0.306±0.027 vs0.172±0.034(P<0.001)),内膜面积(intima area)呈增加趋势,I/M比值下降(0.132±0.035 vs 0.204±0.038(P<0.01)),I+M/Vessel wall比值显著增高(0.684±0.046 vs 0.569±0.067(P<0.05));与HFp EF组相比,HFp EF+ARNI组中膜面积(0.220±0.041 vs 0.306±0.027(P<0.01))、I+M/Vessel wall(0.552±0.08 vs 0.684±0.046(P<0.05))比值显著下降,内膜面积呈降低趋势,I/M比值显著增高(0.195±0.01 vs0.132±0.035(P<0.05))。免疫组化(IHC)结果显示:与Sham组相比,HFp EF组肺动脉α-SMA阳性面积、PCNA阳性细胞数都显著增加;与HFp EF组相比,HFp EF+ARNI组肺动脉α-SMA阳性面积、PCNA阳性细胞数都显著降低。Western Blot结果显示:与Sham组相比,HFp EF组肺动脉中Cyclin D1、PCNA相对表达显著上升,α-SMA、PKG相对表达显著下降;而与HFp EF组相比,HFp EF+ARNI组肺动脉中增殖相关蛋白Cyclin D1、PCNA相对表达被显著抑制,α-SMA、PKG蛋白相对表达显著上升。上述结果提示,HFp EF组小鼠肺动脉增殖表现为以平滑肌细胞增殖为主的血管中内膜增厚,ARNI能减弱肺动脉平滑肌增殖,减缓肺动脉重塑。结论:ARNI能显著降低HFp EF小鼠肺动脉及右心室压力、改善左心室舒张功能及右心室肥厚、抑制肺动脉平滑肌增殖。目的:探讨ARNI调控原代小鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的机制。方法:使用组织贴块法提取C57BL/6J小鼠原代肺动脉平滑肌细胞(pulmonary Artery Smooth Muscle Cells,PASMCs)。使用血小板衍生生长因子-BB(platelet Derived Growth Factor BB,PDGF-BB)诱导PASMCs增殖,ARNI原料药LCZ696和PKG特异性抑制剂KT5823干预PASMCs。使用免疫荧光染色α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)鉴定PASMCs;使用Edu、CCK8检测PASMCs增殖能力;Transwell、伤口愈合实验检测PASMCs迁移能力;流式细胞术(flow cytometer,FCM)检测PASMCs细胞周期的分布;FCM、荧光酶标仪检测PASMCs中Ca2+含量;Western Blot检测Cyclin D1、Cyclin E1、PCNA、VASP、PKG、MMP-2、α-SMA、SM-22α的蛋白表达。结果:(1)PASMCs免疫荧光结果显示:α-SMA染色强阳性。(2)Edu、CCK8、Western Blot结果显示:与Control组相比,血小板衍生生长因子干预后PASMCs细胞增殖相关蛋白Cyclin D1、PCNA蛋白表达显著增加,PKG蛋白表达及p-VASP磷酸化显著减少,处于增殖期PASMCs显著增加;与血小板衍生生长因子组相比,ARNI处理后PASMC细胞增殖相关蛋白Cyclin D1、PCNA蛋白表达显著减少,PKG蛋白表达及VASP磷酸化显著增加,处于增殖期的细胞显著减少;PKG特异性抑制剂KT5823削弱了ARNI对血小板衍生生长因子诱导的细胞增殖的抑制作用。上述结果提示,ARNI使PKG作用底物血管扩张刺激磷蛋白(Vasodilator stimulated phosphoprotein,VASP)磷酸化为p-VASP(ser239),抑制由血小板衍生生长因子诱导的PASMCs增殖,该效应可被PKG特异性抑制剂KT5823阻断,表明PKG激活可以抑制PASMCs增殖。(3)FCM、Western Blot结果显示:与Control组相比,血小板衍生生长因子干预后,处于S期的PASMCs细胞数量显著增加;与血小板衍生生长因子组相比,ARNI处理后PASMCs处于G0/G1期细胞数量显著增加,S期细胞数量显著减少,而G2/M期细胞数量无显著变化,而给予KT5823会削弱了ARNI对血小板衍生生长因子诱导的G1/S转化;与Control组相比,血小板衍生生长因子干预后,PASMCs细胞周期相关蛋白Cyclin D1、Cyclin E1表达显著增加;与血小板衍生生长因子组相比,ARNI处理后PASMCs细胞周期相关蛋白Cyclin D1、Cyclin E1蛋白表达显著下降,KT5823能有效消除ARNI对由血小板衍生生长因子诱导引起的蛋白表达变化。上述结果提示,ARNI通过减弱细胞周期蛋白的表达,减缓G1/S转换而抑制PASMCs增殖。(4)Transwell、伤口愈合实验:与Control组相比,血小板衍生生长因子能显著增强PASMCs的迁移速度;与血小板衍生生长因子组相比,血小板衍生生长因子+ARNI组PASMCs迁移速度显著下降;而KT5823削弱了ARNI对血小板衍生生长因子诱导的PASMCs迁移的抑制作用。Western Blot结果显示:血小板衍生生长因子干预后,MMP-2蛋白表达显著增加,α-SMA、SM22α蛋白表达显著降低;与血小板衍生生长因子组相比,血小板衍生生长因子+ARNI组MMP-2蛋白表达显著减少,α-SMA、SM22α蛋白表达显著增加;KT5823能有效消除ARNI对由血小板衍生生长因子诱导引起的蛋白表达变化。上述结果提示,ARNI有效减弱由血小板衍生生长因子诱导的PASMCs细胞迁移,而该效应可被PKG特异性抑制剂KT5823阻断,表明ARNI经PKG介导,减弱PASMCs细胞迁移能力。(5)FCM、荧光酶标仪结果显示:血小板衍生生长因子干预后细胞内Ca2+浓度显著增加;与血小板衍生生长因子组相比,血小板衍生生长因子+ARNI组细胞内Ca2+浓度显著降低;KT5823显著抑制了ARNI对血小板衍生生长因子诱导的细胞内钙离子浓度降低。上述结果提示,ARNI有效减弱由血小板衍生生长因子诱导的PASMCs内Ca2+浓度升高,而该效应可能被KT5823阻断,表明ARNI经PKG减弱PASMCs内Ca2+浓度升高。结论:ARNI至少是部分通过激活c GMP/PKG信号通路发挥抑制由血小板衍生生长因子诱导的PASMCs增殖、迁移、细胞周期改变和细胞内Ca2+浓度增加等作用。