血浆经过肾小球滤过屏障超滤形成原尿是肾脏的重要功能之一。肾小球的滤过屏障由带窗孔的内皮细胞、肾小球基底膜以及高度分化的足细胞组成。滤过屏障的缺陷可导致蛋白尿的发生并可能引起肾病综合征。 肾小球足细胞由胞体、初级突起和称之为足突的二级突起组成。足细胞足突通过紧邻肾小球基底膜的裂孔隔膜相互连接。近年来研究表明编码足细胞蛋白nephrin、podocin、CD2AP、α-actinin-4等基因突变与肾病综合征的发生密切相关。其中编码podocin的NPHS2基因突变导致遗传性激素抵抗肾病综合征的发生。Podocin基因敲除小鼠生后出现大量蛋白尿,提示podocin在肾小球蛋白尿发生中发挥重要作用。 为了深入了解podocin在肾病综合征蛋白尿发生机制中的作用,我们进行了以下两部分的研究。 第一部分 Podocin在大鼠微小病变肾病模型中的表达及意义 目的 观察裂孔隔膜蛋白podocin和胞浆α-actinin-4在大鼠氨基核苷嘌呤霉素肾病模型肾小球中的表达与分布。通过比较两者的改变与蛋白尿发生的关系,阐明裂孔隔膜蛋白podocin在足细胞早期损伤中的作用。方法 建立大鼠氨基核苷嘌呤霉素肾病模型,采用免疫荧光、RT-PCR、western-blot技术观察podocin在肾病模型不同时间点大鼠肾小球中的表达和分布变化,采用免疫荧光与免疫组织化学、RT-PCR技术检测肾小球α-actinin-4的表达改变。结果 ①Podocin在正常大鼠肾小球沿毛细血管襻呈均匀连续的线样分布;肾病模型第1天podocin的分布在肾小球局部呈颗粒状;第3天呈现弥散性的颗粒状;第10天呈粗大的颗粒状;第20天podocin的分布逐渐恢复为线样。α-actinin-4在正常大鼠肾小球沿毛细血管襻呈点线样分布,在蛋白尿