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2014、2015年,美国、巴西等国爆发了一种类似于口蹄疫症状的水泡性疾病,该病原被确定为塞尼卡病毒A(Senecavirus A,SVA)。为了鉴别和诊断塞尼卡病毒和口蹄疫病毒,针对塞尼卡病毒的VP1基因和口蹄疫的5’UTR基因,合成了特异性的引物,优化了反应体系和扩增条件,建立了一种同时检测塞尼卡病毒和口蹄疫病毒的方法。对建立的双重RT-PCR方法进行特异性和敏感性试验,结果表明,建立的双重RT-PCR检测方法敏感性强,特异性好,对塞尼卡病毒和口蹄疫病毒最低检出量分别为SVA 10~4 copies/μL、FMDV 10~3copies/μL。本研究建立的方法对临床感染口蹄疫和塞尼卡病毒的家畜进行快速鉴别具有重要意义。