论文部分内容阅读
目的:肾脏的急性缺血缺氧性损伤是泌尿外科常见病,以肾小管间质纤维化为主要病理特点,成体干细胞在急性肾脏损伤动物模型中可以促进肾脏结构修复、改善肾脏功能,肝细胞生长因子作为抗纤维化的主要生长因子,在成体干细胞干预的急性肾脏损伤动物模型实验中起重要作用,然而以往的研究对象主要以动物模型为主,成体干细胞对肝细胞生长因子的具体调节机制尚不清。本实验通过体外分离、培养人的脐带间充质干细胞,来干预离体低氧预处理后的大鼠近端肾小管上皮细胞,探讨在体外培养条件下人脐带间充质干细胞对低氧预处理大鼠近端肾小管上皮细胞肝细胞生长因子表达的影响,为今后研究间充质干细胞治疗肾功能损害提供可靠的理论依据。方法:采用贴壁培养的方法无菌条件下分离、培养、传代人脐带间充质干细胞,细胞融合达90%时更换无血清培养基(serum-free medium,SFM)培养24 h,收集细胞上清液即为人脐带间充质干细胞条件培养基(condition medium,CM);大鼠近端肾小管上皮细胞(tubular epithelial cells,TECs)于低氧环境处理1 h后,随机分为对照组与CM干预组,分别培养24 h和48 h后检测TECs中大鼠肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)的mRNA水平、收集上清液测定大鼠HGF蛋白的含量,同时收集CM干预组中0h,12h、24h、48h的上清液,测定其中人来源HGF蛋白的含量,并对TECs在CM干预24 h和48 h后行免疫组化定性人的HGF蛋白的表达。结果:在低氧预处理的培养环境下,CM干预组中,TECs中大鼠来源的HGF mRNA表达水平在24 h和48 h时明显高于对照组(P<0.05);上清液中大鼠HGF蛋白的含量在24 h和48 h,CM干预组显著高于对照组(P<0.05);上清液中人的HGF蛋白的含量随时间进行性增高,免疫组化染色显示在24 h和48 h大鼠TECs中能检测人的HGF蛋白的表达。结论:在低氧预处理的体外培养环境下,脐带间充质干细胞的条件培养基可以显著的上调大鼠自身的HGF水平,并可诱导大鼠TECs合成和分泌人的HGF蛋白,并为探究脐带间充质干细胞治疗肾功能损害提供可靠的理论依据。