【摘 要】
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[目的]筛选针对灰飞虱Laodelphax striatellus RNAi的dsRNA高效纳米递送载体.[方法]使用壳聚糖、碳量子点(carbon quantum dot,CQD)和lipofectamine 2000作为代表性纳米粒子,分别与dsRNA进行混合,形成稳定的3种不同复合颗粒,利用光谱法检测其dsRNA装载率.以灰飞虱膜结合型海藻糖酶基因LsStre为靶标基因来测试3种纳米粒子的RNAi效率.用不同纳米粒子包裹的dsLsStre喂食后,通过荧光实时定量PCR(qPCR)检测喂食后2 d灰飞
【机 构】
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江苏省植物保护植物检疫站,南京210036;南京农业大学植物保护学院,南京210095;江苏省植物保护植物检疫站,南京210036;南京农业大学植物保护学院,南京210095;南京财经大学食品科学与工
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[目的]筛选针对灰飞虱Laodelphax striatellus RNAi的dsRNA高效纳米递送载体.[方法]使用壳聚糖、碳量子点(carbon quantum dot,CQD)和lipofectamine 2000作为代表性纳米粒子,分别与dsRNA进行混合,形成稳定的3种不同复合颗粒,利用光谱法检测其dsRNA装载率.以灰飞虱膜结合型海藻糖酶基因LsStre为靶标基因来测试3种纳米粒子的RNAi效率.用不同纳米粒子包裹的dsLsStre喂食后,通过荧光实时定量PCR(qPCR)检测喂食后2 d灰飞虱2龄若虫中LsStre mRNA表达水平,并检测和计算灰飞虱2龄若虫在6 d内的校正死亡率,以裸dsLsStre引起的2龄若虫死亡率为对照,评价3种纳米载体对LsStre的RNAi增效作用.[结果]3种纳米载体均能负载dsEgfp,且这3种纳米载体复合dsEgfp的效率均在95％以上.3种纳米材料对灰飞虱2龄若虫的毒性均较弱.同未用纳米粒子包裹的裸dsLsStre喂食组(对LsStre表达量的抑制率为46％)相比,壳聚糖和CQD能够显著提高LsStre的RNAi效率(对LsStre表达量的抑制率分别为78％和84％),而lipofectamine 2000不能显著提高LsStre的RNAi效率(抑制率为52％).壳聚糖和CQD可以有效提高喂食dsLsStre对灰飞虱2龄若虫的致死效应,在连续喂食6 d后,灰飞虱2龄若虫的校正死亡率分别达到76％和82％,与直接用裸dsLsStre处理的对照组校正死亡率(35％)相比,增效系数分别达到2.17和2.34,lipofectamine 2000的增效能力最弱,其与dsLsStre的复合颗粒处理引起灰飞虱2龄若虫死亡率为38％,增效系数为1.09.[结论]壳聚糖和CQD纳米载体能够显著提高灰飞虱对于喂食dsRNA的敏感性,而lipofectamine 2000的RNAi增效作用较弱.研究结果有助于评价纳米载体在灰飞虱RNAi中的增效作用,为进一步开发和筛选有效的RNAi纳米载体,实现害虫绿色防控,提供了理论依据和应用策略.
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