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根据羊痘病毒基因组设计引物，建立了检测羊痘病毒P32基因的PCR方法，并扩增了疫苗毒株、标准毒株、贵州分离株的P32基因；应用生物学软件对山羊疸和绵羊痘病毒P32基因的酶切位点进行分析，选择合适的限制性内切酶对P32基因进行酶切。结果表明，以SDS-蛋白酶K法提取的病毒DNA在含量和纯度上均高于Trizol法，更有利于PCR扩增；所建立的PCR方法对细胞感染物及山羊痘疹样本均能扩增出特异性的目的DNA条带；软件分析选择限制性内切酶HinfⅠ对羊痘病毒P32基因的PCR产物进行酶切鉴定，可以有效区分山羊痘病