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目的 研究乙型肝炎病毒(HBV)复制调控元件增强子Ⅰ(ENH Ⅰ)及前S2(Pre-S2)抗原基因对HBV DNA疫苗诱导的免疫应答的影响.方法 采用常规聚合酶链反应(PCR)从HBV adr亚型全基因DNA序列中分别扩增HBsAg、PreS2-HBsAg、HBsAg-ENH Ⅰ和PreS2-HBsAg-ENH Ⅰ基因片段,重组到VR1012载体中,构建4种HBV DNA疫苗,转染HepG2细胞并免疫Balb/C小鼠.通过细胞免疫化学、酶联免疫分析(ELISA)、酶联免疫斑点试验(ELISPOT)等方法检测其在HepG2细胞内的表达及小鼠的体液及细胞免疫应答.结果 转染的HepG2细胞表达相应的目的蛋白,ENH Ⅰ及Pre-S2抗原基因均可增强HBV DNA疫苗转染HepG2细胞表达HBsAg;免疫接种小鼠后第2周产生抗-HBs及HBsAg特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL),Pre-S2抗原基因可增强HBV DNA疫苗免疫Balb/C小鼠诱导的抗-HBs及HBsAg特异性CTL的产生,ENH Ⅰ基因对免疫应答无影响.结论 ENHⅠ及Pre-S2抗原基因均可增强HBV DNA疫苗转染HepG2细胞表达HBsAg,Pre-S2抗原基因可增强HBV DNA疫苗免疫Balb/C小鼠引起的免疫应答。