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目的:应用3种不同方法分离兔耳软骨来源干/祖细胞(CSPCs)，对比3种方法的可靠性。方法:2019年1月至2019年12月选取4个月龄健康日本大耳白兔(由中国医学科学院整形外科医院实验动物中心提供)取耳软骨，酶消化法得到软骨细胞，简单随机分为以下4组，纤维连接蛋白黏附＋低密度筛选法(FN＋LD组)，单纯纤连蛋白黏附法(FN组)，低密度筛选法(LD组)，未经筛选的软骨细胞(CC组)。利用流式细胞术检测间充质干细胞标志物CD44和CD90的表达，比较细胞自我更新和多向分化能力的差异。两样本组间比较应用n t检验，多组间比较采用方差分析。n 结果:3种筛选方法获得的CSPCs均高表达CD44和CD90；FN＋LD组与FN组CD44表达率均高于LD组[(98.13±0.25)%比(95.40±0.43)%，n t＝3.521，n P<0.01；(97.77±1.33)%比(95.40±0.43)%，n t＝4.148，n P<0.05]；FN＋LD组CD90表达高于LD组[(95.47±0.66)%比(92.07±1.20)%，n t＝9.087，n P<0.01]，差异均有统计学意义。与CC组比较，FN＋LD、FN、LD组克隆形成率升高[(15.80±2.68)%比(4.80±0.75)%，n t＝8.751，n P<0.01；(20.80±1.64)%比(4.80±0.75)%，n t＝19.400，n P<0.01；(8.40±2.61)%比(4.80±0.75)%，n t＝2.939，n P<0.05]；FN＋LD组克隆形成率高于LD组[(15.80±2.68)%比(8.40±2.61)%，n t＝4.422，n P<0.01]，低于FN组[(15.80±2.68)%比(20.80±1.64)%，n t＝3.553，n P<0.01]，差异均有统计学意义。成骨与成脂能力FN＋LD、FN、LD组均显著高于CC组(66.84±1.72比59.42±2.20，n t＝5.939，n P<0.01；69.46±1.95比59.42±2.20，n t＝7.630，n P<0.01；63.34±1.44比59.42±2.20，n t＝3.330，n P<0.01与26.34±0.57比13.40±0.84，n t＝26.080，n P<0.01；26.41±1.12比13.40±0.84，n t＝20.820，n P<0.01；26.58±0.76比13.40±0.84，n t＝26.080，n P<0.01)，差异均有统计学意义；FN＋LD组成骨能力高于LD组(66.84±1.72比63.34±1.44，n t＝3.493，n P<0.01)，低于FN组(66.84±1.72比69.46±1.95，n t＝2.257，n P0.05)。n 结论:纤维连接蛋白黏附＋低密度筛选法、单纯纤连蛋白黏附法和低密度筛选法均能获得CSPCs，其表面标记、自我更新和分化能力差异与筛选方法有关。