【摘 要】
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目的 建立黑巧克力中4种牛奶过敏原蛋白的超高效液相色谱-串联质谱检测方法.方法 从Uniprot数据库筛选牛奶主要过敏原蛋白的特异肽段,用Skyline工具模拟胰酶酶切,确定各肽段的多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)方法.50mmol/L碳酸氢铵(含2mol/L尿素)提取巧克力中 目标蛋白,14000 r/min、4℃离心除脂,胰酶酶解上清液,固相萃取柱净化,Peptide BEH C18(130 ?,2.1 mm×100 mm,1.7 μm)色谱柱分离,以乙腈
【机 构】
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首都医科大学公共卫生学院,北京 100069;北京市疾病预防控制中心,北京市预防医学研究中心,食物中毒诊断溯源技术北京市重点实验室,北京 100013;首都医科大学公共卫生学院,北京 100069;北
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目的 建立黑巧克力中4种牛奶过敏原蛋白的超高效液相色谱-串联质谱检测方法.方法 从Uniprot数据库筛选牛奶主要过敏原蛋白的特异肽段,用Skyline工具模拟胰酶酶切,确定各肽段的多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)方法.50mmol/L碳酸氢铵(含2mol/L尿素)提取巧克力中 目标蛋白,14000 r/min、4℃离心除脂,胰酶酶解上清液,固相萃取柱净化,Peptide BEH C18(130 ?,2.1 mm×100 mm,1.7 μm)色谱柱分离,以乙腈和水[均含0.1％(V/V)甲酸]为流动相进行梯度分离,标准加入法定量.结果 4条特异肽段FFVAPFPEVFGK、NAVPITPTLNR、AVPYPQR和ALPMHIR可分别作为αS1-酪蛋白、αS2-酪蛋白、β-酪蛋白、β-乳球蛋白的定量肽段.其质量浓度与质谱响应峰面积呈现良好线性关系(R2＞0.99),方法的检出限和定量限分别为50～100和160～350 μg/kg,加标回收率为60.6％～116.7％,相对标准偏差均小于20％(n=6).结论 该方法灵敏、准确、高效,适于检测黑巧克力中4种牛奶过敏原蛋白.
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