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目的:建立竞争ELISA法测定抗新型冠状病毒(SARS-CoV-2)RBD单克隆抗体对RBD与ACE2蛋白结合的阻断活性,并对方法进行验证,同时与蚀斑减少中和试验(plaque reduction neutralization test,PRNT)测得的活病毒中和活性进行比较及相关性分析.方法:以RBD-Fc为包被抗原,加入ACE2-His和抗SARS-CoV-2 RBD单抗,两者竞争性结合RBD,使用辣根过氧化酶标记的抗6×His抗体作为二抗,建立检测抗SARS-CoV-2 RBD单抗阻断RBD与其受体ACE2结合的竞争ELISA法,并对该方法进行专属性、相对准确度、精密度、线性和范围的验证.采用该方法对7株SARS-CoV-2单抗阻断活性进行检测,并将结果与PRNT法检测结果进行比较及相关性分析.结果:建立的竞争ELISA法能有效检测抗SARS-CoV-2 RBD单抗阻断RBD与ACE2蛋白结合的作用,其阻断能力存在量效关系,且符合四参数方程;理论效价为64％,80％,100％,125％,156％的样品测定10次,相对偏倚均在±20％范围内;以效价理论值的对数(横坐标)对其相应的效价测定值的对数(纵坐标)作直线回归,回归方程为y=1.156x-0.0213,斜率在0.8 ～1.25之间,相对准确度良好.每个效价水平相对效价测定值的几何变异系数(geometric coefficient of variation,GCV)分别为2.6％,5.2％,3.6％,3.4％和10.2％,均＜20％,精密度良好;直线回归方程相关系数为0.985,线性符合要求.本方法相对准确度、中间精密度和线性均符合要求的效价水平范围为64％ ～ 156％.7株SARS-CoV-2 RBD单抗的检测结果与PRNT法检测结果具有较好的相关性.结论:成功建立了抗SARS-CoV-2 RBD单抗竞争ELISA的检测方法,该方法具有良好的专属性、相对准确度、精密度和线性,并与PRNT法检测结果具有较好的相关性,可用于间接评价相关SARS-CoV-2单抗对活病毒的中和活性.