【摘 要】
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为了给规模化生产牛病毒性腹泻病毒（BVDV）和牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）提供悬浮细胞培养方法，本试验采用4种降血清方法，使贴壁MDBK细胞逐步适应了悬浮培养环境，最终获得了1株MDBK悬浮细胞株，同时摸索出MDBK悬浮细胞株培养BVDV和IBRV抗原的最佳参数；将MDBK悬浮细胞株扩大到60 L和500 L后连同MDBK贴壁细胞一同接种BVDV和IBRV,比较3种细胞培养后的病毒滴度；通过使
【基金项目】
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国家重点研发计划资助（2017YFD0500903）；
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为了给规模化生产牛病毒性腹泻病毒（BVDV）和牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）提供悬浮细胞培养方法，本试验采用4种降血清方法，使贴壁MDBK细胞逐步适应了悬浮培养环境，最终获得了1株MDBK悬浮细胞株，同时摸索出MDBK悬浮细胞株培养BVDV和IBRV抗原的最佳参数；将MDBK悬浮细胞株扩大到60 L和500 L后连同MDBK贴壁细胞一同接种BVDV和IBRV,比较3种细胞培养后的病毒滴度；通过使用悬浮培养方法制备BVDV-IBRV二联灭活疫苗，按照2.00、1.00、0.50 mL/头和0.25 mL/头4个剂量免疫健康牛，确定其攻毒保护效果，继而免疫不同年龄黑白花奶牛群体（包括犊牛、后备母牛和成年母牛）,检测免疫后牛群的BVDV和IBRV中和抗体效价。结果显示：在60 L和500 L规模化放大培养过程中，IBRV病毒滴度各为8.25 lgTCID50/mL和8.00 lgTCID50/mL,BVDV病毒滴度各为8.00 lgTCID50/mL和7.75 lgTCID50/mL,与MDBK贴壁细胞株产毒毒价几乎相同；免疫攻毒保护试验中，最低免疫剂量为1.0 mL/头，免疫保护率能在80%以上；二联灭活苗免疫的牛群试验中，IBRV和BVDV中和抗体几何平均值均显著高于未免疫组，达到了免疫保护效果。结果表明，本试验成功筛选到1株MDBK悬浮培养细胞株，并且通过悬浮培养工艺制备的BVDV-IBRV二联灭活疫苗免疫效果良好，该MDBK细胞全悬浮培养株的成功驯化为疫苗规模化制备提供了科学依据。
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