6种不同的氨基酸对仿刺参群体引诱效果评价

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  摘    要:水生动物能够感受水体中的化学信号寻找食物并且会对食物产生选择偏好性,仿刺参作为我国的重要海水养殖物种具有极高的经济效益,但仿刺参特殊的生活习性给采捕工作带来极大困难。本研究以仿刺参群体行为生态学为方向,利用行为学迷宫,使用视频记录和分析的方法,探究不同氨基酸(精氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、亮氨酸、牛磺酸、蛋氨酸)不同添加浓度(2%,10%,20%,30%,40%)引诱剂对群体仿刺参引诱效果差异。结果表明:不同类型的氨基酸对仿刺参的引诱效果不同,并且引诱效果随着氨基酸的浓度的变化而变化;6种氨基酸中,仿刺参对40%精氨酸的引诱显著排斥,而被2%苯丙氨酸和30%牛磺酸显著吸引,且仿刺参在30%牛磺酸引诱物处停留时间最长且选择率最高。本试验为仿刺参高效采捕提供理论和技术支撑。
  关键词:仿刺参;行为生态学;氨基酸;引诱
  中图分类号: S963       文献标识码: A       DOI 编码:10.3969/j.issn.1006-6500.2021.08.007
  Evaluation of Trapping Effect of Six Different Amino Acids on Sea Cucumber Population
  FAN Xinhao, SUN Mingli, ZHOU Wenli
  (College of Fisheries, Tianjin Agricultural University, Tianjin 300384, China)
  Abstract: Aquatic animals can feel the chemical signals in the water, looking for food and having a preference for food. As an important mariculture species in China, Apostichopus japonicus has high economic benefits, but its special living habits bring great difficulties to the collection and capture work. In this study, we took the population behavioral ecology of Apostichopus japonicus as the direction, using the behavioral maze and the method of video recording and analysis, we explored the difference of attractants with different concentrations (2%, 10%, 20%, 30% and 40%) of different amino acids (arginine, phenylalanine, proline, leucine, taurine and methionine) on the attractant effect of Apostichopus japonicus. The results showed that different types of amino acids had different attraction effects on Apostichopus japonicus, and the attraction effect varied with the concentration of amino acids.Among the six amino acids, Apostichopus japonicus significantly rejected the attraction of 40% arginine, but was significantly attracted by 2% phenylalanine and 30% taurine, and Apostichopus japonicus stayed at the attractant of 30% taurine for the longest time and had the highest selection rate. This experiment could provide theoretical and technical support for efficient harvesting of Apostichopus japonicus.
  Key words:Apostichopus japonicus; behavioral ecology; amino acids;attraction
  仿刺參(Apostichopus japonicus)是棘皮动物门海参纲中的一员,是棘皮类中价值和营养最高的商品种之一,作为海洋中最古老的无脊椎生物,仿刺参主要分布在我国北方东至日本和朝鲜半岛北至俄罗斯东部[1]。虽然我国仿刺参的养殖面积逐年递增,但我国仿刺参养殖产业仍存在产值低、总产量不高等问题[2]。究其原因主要有以下几点:(1)仿刺参作为海洋营底栖生物,收获仿刺参的方式有且仅能依靠潜水员下海采捕,受不同天气和海况影响潜水采捕有难有易,并且受海况差往往伴随着底质浑浊的现象和仿刺参体表颜色与海床相近等因素往往无法进行仿刺参的高效采捕,大大制约了采捕工作;(2)仿刺参独特的行为如夏眠行为制约着仿刺参养殖业的发展,Yang等[3]研究发现当海水水温高于20 ℃时仿刺参会进入夏眠状态,处于夏眠状态的仿刺参会寻找礁石缝隙等人们不容易察觉的区域进行栖息,仿刺参独特的行为大大增加仿刺参的采捕难度。因此,研发更加高效、普适的采捕方法是目前我国仿刺参养殖业亟待解决的问题。   水生动物生活在水环境中,在水环境中化学信息的传递显得特别重要,在隔光和流水条件下,化学溶出物的信息特点和水流刺激对水产动物的趋向行为更为重要,味觉性诱食剂就是根据此特点对味觉化学感受器刺激使得水产动物趋向食物源并完成吞咽动作。水生动物对某种饵料的嗜好其实就是对饵料中存在的某种化学物质的嗜好,此物质也被称为化学引诱剂[4],如氨基酸就是常用的水产化学引诱剂之一。水生动物对氨基酸营养的需求主要是对自身不能合成氨基酸的需求,研究表明,外源性氨基酸对水产生物有着极强的引诱作用。目前国内外对氨基酸对水生生物的引诱效果的研究多集中于虾、蟹和鱼类等水生生物,而氨基酸对仿刺参引诱效果国内外极少研究,因此开展氨基酸引诱剂对仿刺参引诱效果的研究有助于填补仿刺参捕捞学的空白。
  目前对氨基酸对仿刺参的影响的研究多集中在对仿刺参营养需求等方面,但有关氨基酸作为化学引诱物对仿刺参行为的影响等方面却未见报道,因此本研究通过对实验室条件下对仿刺参运动行为和摄食行为的记录及分析,评价了6种不同的氨基酸对仿刺参群体诱集效果,以寻找能够促使仿刺参进行诱集的最佳氨基酸剂其浓度,旨在为更好地理解仿刺参捕捞与诱集特征规律提供参考。
  1 材料和方法
  1.1 仿刺参采集及预处理
  试验于2019年11月—2020年1月在山东烟台莱州蓝色海洋集团进行,试验仿刺参(92.6±30 g)产自莱州朱旺港海水养殖场,移入3 000 L养殖池盐度3.3%,pH 8.0)进行暂养,养殖水体温度保持在15±0.5 ℃,溶解氧保持在6.0 mg·L-1以上。试验前,每天早上8点用人工饲料(70%海泥和30%马尾藻粉)饲喂海参,试验用海泥购自山东东方海洋科技股份有限公司,每日喂养前虹吸清洁前1 d的仿刺参粪便和残饵,暂养2周后,于仿刺参正常活动及摄食时挑选生命特征健康规格相近仿刺参进行试验。
  1.2 试验设计
  1.2.1 引诱剂的制备 引诱剂由不同种类氨基酸与海泥混合后由海水固定而成。将试验氨基酸和海泥粉末混合均匀后,加入海水后制成球形固体(湿质量5 g)。氨基酸的质量百分浓度设5个处理,分别为2%,10%,20%,30%,40%,50%。引诱剂的对照组为不添加氨基酸直接由海泥和海水组成的等重球形混合物(湿质量5 g)。试验用氨基酸及其主要功能如表1所示。
  1.2.2 诱集试验设计及数据收集 诱集试验前,将海参转移到50 L玻璃养殖缸中进行暂养。为了使试验效果更有效,所有海参在进行试验前需要饥饿24 h。试验开始时,将5只海参放入Y型迷宫中,迷宫中有过滤消毒过盐度为3.3%的海水。
  试验用行为学迷宫为Y形,其长宽高为0.78 m ×40 m ×0.15 m (L × w ×h),迷宫底部设置适应室,适应室与Y形迷宫的两条臂通过可移动的塑料切割台分开。本试验中使用静水水体避免使用水流交换以减少动物朝向食物源的影响。在每次试验中,试验组和对照组的引诱剂质量相同(5 g),分别放置在Y型迷宫臂顶端并于引诱剂上端放置以气石加快引诱剂中化学物质在试验水体中的扩散速度,试验迷宫、仿刺参初始位置、引诱剂及气石放置位置如图1所示。行为试验前,将海参放入迷宫室中适应2 h。试验结束后,应将每个迷宫清洗干净,消毒,换水,避免药物残留。试验仿刺参不进行重复使用。
  1.3 诱集行为记录与追踪
  试验使用将Brinno TLC-200缩时摄影机,将摄影机的分辨调整至1 280 ×720像素架设在试验迷宫上方,持续拍摄仿刺参的运动,视频拍摄时设置为每秒 10 帧,每隔5 s进行一次拍摄。每个氨基酸的每个浓度都进行以5个仿刺参为试验对象的10次重复试验,每次试验时间为10 h。
  1.4 数据分析
  诱集效果评价根据仿刺参对试验两端的选择、积极选择率和停留时间进行判断,其中积极选择率按下列公式计算:积极选择率(%)=(仿刺参引诱剂端选择数/仿刺参选择总次数)×100,当仿刺参在试验引诱剂放置端停留超过20 min以上视为仿刺参被吸引并记录仿刺参在引诱剂端的选择次数。
  因为数据不符合正态分布,所以利用SPSS 19.0非参数检验统计分析中的Kruskal-Wallis检验方法检验其显著差异后对出现显著差异组进行Nemenyi检验(两两比较),以P<0.05作为差异显著的标志。
  2 结果与分析
  2.1 不同浓度氨基酸对仿刺参集群诱集效果评价
  2.1.1 不同浓度氨基酸对仿刺参选择的影响 图1为对5头仿刺参在不同浓度不同氨基酸处理下的选择对比分析的结果。除去40%精氨酸、2%苯丙氨酸和30%牛磺酸处理外,其他氨基酸处理对仿刺参的选择并无显著影响(P>0.05),当引诱氨基酸为40%精氨酸时仿刺参对试验端出现显著的排斥现象(P<0.05),当引诱氨基酸为2%苯丙氨酸时,试验端显著吸引仿刺参(P<0.05),当引诱氨基酸为30%牛磺酸时,试验端对仿刺参的吸引效果极显著(P<0.01)。2.1.2 不同浓度氨基酸对仿刺参积极选择率的影响图2为5头仿刺参在不同氨基酸处理下仿刺参的积极选择率随浓度的变化。结果表明,仿刺参的积极选择率随脯氨酸、亮氨酸浓度的增加呈先上升后下降的趋势,随蛋氨酸浓度的增加呈上升-下降-上升的趨势,随着精氨酸浓度的升高,仿刺参的积极选择率呈下降-上升-下降的波动趋势,同一氨基酸处理不同浓度间积极选择率并无显著差异(P>0.05),且这4种氨基酸处理仿刺参的积极选择率绝大多数不高于55%;随着苯丙氨酸处理浓度的增加,仿刺参的积极选择率呈下降趋势,当质量浓度分数为2%时,仿刺参的积极选择率最高为58%;随着牛磺酸处理浓度的增加,仿刺参的积极选择率呈先升高后降低的趋势,且各浓度处理均高于同浓度的其他氨基酸处理,在牛磺酸质量分数30%时达到最高值,显著高于其他氨基酸处理组(P<0.05)。   2.1.3 不同浓度氨基酸对仿刺参引诱时间的影响
  5头仿刺参在不同浓度不同氨基酸处理下的引诱时间如图3所示,氨基酸处理因浓度不同对仿刺参的引诱效果表现不同,同浓度下均以牛磺酸对仿刺参的引诱时间为组内最高值,且牛磺酸对仿刺参的引诱时间随牛磺酸质量浓度分数的提高出现先上升后下降的趨势并在30%时达到最高值;试验观察发现,仿刺参在试验时间7~8 h时诱集数目达到最高。
  3 结论和讨论
  水生动物能够感受水体中的化学信号寻找食物[26-27]。研究表明水生动物不论何种养殖环境下,均会对食物产生选择偏好性[28-29]。而引诱剂是影响水生动物选择的主要影响因子。Smith等[30]研究发现如氨基酸等鱼的可溶性物质,会刺激水生动物出现摄食行为;Lauzon-Guay等[31]报道许多棘皮动物如海星(Asterias spp.和Henricia sanguinolenta)、海胆(Strongylocentrotus droebachiensis)能分辨食物丰度的差异,并向食物丰度充足的区域移动;Allen等[32]对新西兰黑足鲍(Haliotis  iris)研究发现,当向自然水体中投放食物时,黑足鲍的摄食行为活动频率显著增加,说明黑足鲍能够通过化学感受器感受水体中的食物;辛孝科[33]研究发现,向仿刺参提供食物时,仿刺参的运动会更加频繁。
  植物可以挥发小分子的化合物,其中包括多种氨基酸,孙侦龙等[34]究发现大型藻类是仿刺参最主要的食物来源,而大型藻类与植物相同也具有合成挥发性化合物的能力,并且这些挥发性物质会随水流而进行传播;伍一军等[35]曾使用迷宫进行不同氨基酸对泥鳅的诱食效果进行评价,试验发现氨基酸的种类和浓度对泥鳅的诱食效果都不相同。本试验中,氨基酸对仿刺参的引诱效果与上述研究相似,同时还发现因有效果会因氨基酸种类和浓度的不同出现差异;此外,同为棘皮动物的海胆对食物和其他海胆具有化学敏感性[36]且研究发现精氨酸是仿刺参体壁主要组成氨基酸[37],因此我们推测逃离受伤同类也可能是仿刺参显著排斥精氨酸原因。
  牛磺酸是一种条件性必需氨基酸,在机体的生理功能调节中起到重要作用,其在海洋无脊椎动物中扮演着极为重要的角色,Allen等[38]研究发现海洋牛磺酸与海洋多毛类的神经冲动传导有关,并作为海洋无脊椎生物信号存在,这可能是在本试验中牛磺酸引诱仿刺参的积极选择率高于其他氨基酸的原因,此外牛磺酸在水生动物的营养代谢、免疫调节、诱食、调节渗透压、细胞膜保护和抗缺氧等方面都发挥重要的作用[39-40],Liu等[41]向饲料中添加牛磺酸可以促进大菱鲆(Scophthalmus maximus)的摄食频率和强度,与本研究显示牛磺酸对仿刺参的引诱效果最好且试验观察到牛磺酸组仿刺参均出现摄食行为相印证,此外研究发现饲料中添加高浓度的牛磺酸会导致大菱鲆与的肠道完整性受损,进而影响摄食,这可能与本试验中过高浓度的牛磺酸会引诱仿刺参效果差相关。
  仿刺参的行为生态学研究可以为仿刺参的养殖管理,野外调查研究,高效捕捞提供有价值的建议,并为仿刺参的工厂化养殖、浅海底播养殖模式的创新提供数据支撑。本文以仿刺参群体作为研究对象,利用视频记录和分析,通过Y型迷宫探究仿刺参对不同氨基酸的选择倾向及对不同氨基酸的引诱效果做出评价。研究发现,氨基酸的类型和浓度大小均会对仿刺参的选择和引诱效果造成影响;6种氨基酸中仿刺参会显著(P<0.05)排斥向40%高精氨酸引诱物处移动;与同浓度的其他氨基酸相比仿刺参对牛磺酸的选择率和引诱时间均处于组间最高值,且仿刺参在30%质量分数的牛磺酸引诱物处停留时间最长且选择率最高(P<0.05)。本试验可为日后仿刺参的高效诱捕提供理论基础及技术支撑。
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