【摘 要】
：
目的 研究肝豆状核变性ATP7B基因高频突变位点，探索全血等位基因特异性-PCR（allelespecificPCR，AS-PCR）技术在该基因4个常见突变检测中的应用。方法针对ATP7B基因4个突变位点（G2333T、C2850T、G2855A、G2975T）设计等位基因特异性弓I物，应用高保真酶对人抗凝全血样本进行聚合酶链反应，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳以判断待检样本有无基因突变及其等位基因型。
【机 构】
：
江苏省苏州大学药学院药理学系苏州市衰老与神经疾病重点实验室,215123,江苏省苏州大学药学院药理学系苏州市衰老与神经疾病重点实验室,215123,江苏省苏州大学药学院药理学系苏州市衰老与神经疾病重点
论文部分内容阅读
目的 研究肝豆状核变性ATP7B基因高频突变位点，探索全血等位基因特异性-PCR（allelespecificPCR，AS-PCR）技术在该基因4个常见突变检测中的应用。方法针对ATP7B基因4个突变位点（G2333T、C2850T、G2855A、G2975T）设计等位基因特异性弓I物，应用高保真酶对人抗凝全血样本进行聚合酶链反应，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳以判断待检样本有无基因突变及其等位基因型。PCR扩增人基因组ATP7B基因第8、12、13外显子，扩增产物直接进行基因序列测定。结果全血AS-PCR法检测ATP7B基因4个基因突变，各位点检测结果与基因序列测定完全相符。27份健康对照血样分型结果G2333T、C2850T和G2975T等3个位点没有出现突变，而G2855A位点突变率则达到了51．8％。22份患者血液样本分型结果显示除G2855A位点外，其余3个位点共检出11例含有突变，阳性率达到50％。结论建立了全血AS-PCR检测肝豆状核变性ATP7B基因4个基因突变的方法，为该病的早期诊断和及早治疗提供了有效的手段。
其他文献
目的 对亲权鉴定中TH01基因座丢失现象进行分析,以确定基因型.方法 应用两套短串联重复序列基因座分型系统对TH01基因座异常分型进行重复验证,并设计TH01单基因座引物进行基因分型,产物经克隆测序分析.结果 在TH01基因座检出稀有等位基因5.2,该稀有基因型在PowerPlex 21分型系统中无法检出,呈现基因座丢失现象,而在Identifiler分型系统中可以准确分型.结论 基因变异可导致稀
患者 男,26岁,未婚.因"B超检查示右侧睾丸肿大,2次检查精液未见精子"来我室行染色体检查.患者表型和智力均正常,无遗传病家族史.细胞遗传学检查:取患者外周血进行细胞培养、制片、显带,计数60个细胞,分析10个核型.患者核型为46,XY,t(9;13)(9pter→ 9q12∷13p12→13pter;9qter→9q12∷13p12→13qter)。
先证者（IV3）男，35岁，因“进行性双下肢僵硬、乏力、行走不稳27年余”到我院就诊。27年前无明显诱因发现双下肢抬高受限，走路、跑步时缓慢、不稳，左右晃动，胸部前倾，走路、上楼梯尚无困难；20年前发现双下肢僵硬、活动不灵活，乏力，拖步行走，身体前倾明显。病情进行性加重，逐步出现下楼梯不稳，跑步不能，上下楼梯困难等症状。
目的 对10个寻常型鱼鳞病(ichthyosis vulgaris,Ⅳ)家系的FLG基因进行突变检测,并分析中国汉族人Ⅳ患者FLG基因的突变热点.方法 用聚合酶链反应扩增10个Ⅳ家系的所有患者及正常成员FLG基因的全部外显子,对扩增产物直接进行DNA测序检测突变,同时选取100名无亲缘关系的正常人作为对照.结果 在7个家系中发现了3种FLG基因的致病突变,包括c.3321delA、c.5757de
患儿女，5月，因“肺炎，营养不良，发育迟缓”入我院中医科治疗。患儿为第2胎第2产，足月顺产，出生体重2900g，出生时无产伤、窒息史。患儿父母为非近亲婚配，表型正常。孕期母亲有感冒病史，未用药治疗，无放射线及有毒有害物质接触史。查体：神清、反应差、呼吸平、双肺湿哕音、哮呜音；心音有力、率齐、腹软；精神反应低于同龄儿；营养不良貌。
目的 通过对3例散发的颅锁骨发育不良患者进行RUNX2基因编码区的扩增及测序,寻找RUNX2基因突变,为家系进行遗传咨询和产前诊断提供依据.方法 抽取患者及其父母外周血,提取基因组DNA,PCR扩增RUNX2基因的7个编码外显子并测序;并对患者突变所在外显子的PCR产物经T-A克隆后再次测序.结果 例1的RUNX2第1外显子发生了1个80bp的c.227_306del杂合性缺失突变,引起读码框移位
目的 探讨云南地区人群系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）与HLA-G基因3qE翻译区（3’untranslated region，3’UTR）3个位点（＋296014bp插入／缺失、＋3035C／T和＋3142C／G）多态性的关联性。方法应用DNA序列测序法对云南地区206例SLE患者及212名健康对照者的HLA-G基因上述3个多态性位点进行基因分型
目的 分析浙江南部地区同种异体肾移植受者杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immunoglobulin-like receptor,KIR)基因多态性的分布情况.方法 采用序列特异性引物聚合酶链反应检测浙江南部地区无血缘关系的416例汉族肾移植受者的KIR基因型,并与其他地区人群的基因型相比较.结果 共检出16个已知的KIR基因,其中2DL4、3DL2～3、3DP1在所有个体中均表
目的 对1例复杂染色体核型的Down-Turner双重综合征进行分子细胞遗传学分析,以指导临床遗传咨询和诊断.方法 在常规染色体核型分析的基础上,结合荧光原位杂交技术并进行家系遗传分析.结果 1例Down-Turner双重综合征患儿染色体核型确诊为46,X,+mar.ish i(14 0r 22)(p10)(D14Z1/D22Z1+)[32]/47,X,der(X)t(X;21)(p22.3;q1
目的 研究Bruton酪氨酸激酶(Bruton,s tyrosine kinase,BTK)基因突变与X连锁无丙种球蛋白血症(X-linked agammaloglobulinemia,XLA)的临床表型的关系.方法 收集临床6例反复呼吸道感染并疑诊XLA的患儿病史、家族史、体格检查及辅助检查资料.采集患儿外周静脉血,PCR扩增BTK基因19个外显子及外显子与内含子连接区,PCR产物直接正反向测序