【摘 要】
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目的 应用小分子RNA干扰(siRNA)技术沉默PD模型中的勿动基因Nogo66,观察其对小胶质细胞激活诱导的PD模型的影响. 方法 SD乳鼠体外原代培养小胶质细胞,通过免疫组化检测小胶质
【机 构】
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广东省增城市人民医院(中山大学附属博济医院)神经内科,中山大学附属孙逸仙纪念医院神经内科
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目的 应用小分子RNA干扰(siRNA)技术沉默PD模型中的勿动基因Nogo66,观察其对小胶质细胞激活诱导的PD模型的影响. 方法 SD乳鼠体外原代培养小胶质细胞,通过免疫组化检测小胶质细胞表面特异性标记物OX-42筛选出小胶质细胞并分成4组,分别为空白对照组、PD模型组,Nogo66 siRNA组及阴性对照组.空白对照组不做任何处理;PD模型组通过添加不同浓度(0.031、0.062、0.125、0.25、0.5、1μg/mL)LPS诱导小胶质细胞建立PD模型;Nogo66 siRNA组在建模的基础上通过RNA干扰技术沉默Nogo66基因;阴性对照组在建模的基础上转染随机顺序的siRNA.采用Western boltting、实时荧光定量PCR检测细胞中Nogo66蛋白及mRNA的表达,ELISA检测多巴胺的含量. 结果 成功筛选出小胶质细胞并诱导PD模型.Nogo66 siRNA转染组转染24h后,小胶质细胞Nogo66基因表达明显减少,与阴性对照组比较,Nogo66基因阻断效率达92.5％±6.8％;转染72 h后,Nogo66基因阻断效率为88.3％±6.2％,差异均有统计学意义(P＜0.05).Nogo66蛋白表达呈现出相同的变化趋势.Nogo66 siRNA转染组转染24h、72h后多巴胺表达均明显升高,与PD组及阴性对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 Nogo66基因可能是PD治疗的靶向基因.
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