观察慢性肾功能不全(CRI)幼鼠胫骨生长板软骨细胞甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrp)受体表达对细胞增殖的影响。
方法雄性2周龄SD幼鼠12只,分为假手术组(暴露左侧输尿管)和CRI组(左侧输尿管结扎),每组6只。术后2周处死幼鼠,检测血PTHrp浓度,分别提取两组幼鼠胫骨生长板软骨细胞进行体外培养至P3代,检测细胞内PTHrp受体表达情况并应用Western印迹定量分析。5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EDU)技术检测两组细胞24 h增殖率。体外构建PTHrp受体mRNA过表达质粒、空载体、敲低质粒干预CRI组软骨细胞,24 h后观测PTHrp受体mRNA表达并定量分析,48 h后观测PTHrp受体表达并定量分析。EDU技术检测3种质粒干预后细胞24 h增殖率。
结果与假手术组相比,CRI组血PTHrp浓度增高[(1.36±0.42)ng/L比(0.77±0.21)ng/L,t=3.913,P=0.001],Western印迹定量分析结果显示,生长板软骨细胞内PTHrp受体表达减少(0.15±0.07比0.41±0.13,t=5.569,P<0.001),24 h细胞增殖率降低[(11.3±3.1)%比(24.6±5.7)%,t=6.482,P<0.001]。PTHrp受体mRNA过表达后CRI组软骨细胞内PTHrp受体mRNA和蛋白表达均增高,细胞24 h增殖率升高,而敲低组PTHrp受体mRNA和蛋白表达均降低,24 h细胞增殖率减低[过表达组(22.8±6.5)%,空载体组(10.2±4.3)%,敲低组(5.6±2.1)%,F=29.840,P<0.001]。
结论肾功能不全幼鼠血PTHrp浓度增高,胫骨生长板软骨细胞内PTHrp受体减少,导致PTHrp促细胞增殖作用减弱,细胞增殖率降低。