【摘 要】
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目的 探讨经超声酸蚀/阳极氧化联合改性钛（titanium modified by ultrasonic acid etching/anodic oxidation,UAT）负载内皮祖细胞外泌体（endothelial progenitor cells-exosome,EPCs-exo）后，对脂肪来源干细胞（adipose-derived stem cells,ADSCs）生长以及成骨、成血管分化
【基金项目】
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沧州市重点研发计划自筹项目（213107003）～～；
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目的 探讨经超声酸蚀/阳极氧化联合改性钛（titanium modified by ultrasonic acid etching/anodic oxidation,UAT）负载内皮祖细胞外泌体（endothelial progenitor cells-exosome,EPCs-exo）后，对脂肪来源干细胞（adipose-derived stem cells,ADSCs）生长以及成骨、成血管分化的影响。方法 取10只SD大鼠脂肪组织及骨髓，分别采用胶原酶消化法和密度梯度离心法分离培养ADSCs及EPCs，并经流式细胞仪鉴定。取第3～5代EPCs采用试剂盒提取exo，并经Western blot检测CD9、CD81进行鉴定。采用超声酸蚀和阳极氧化方法对3D打印技术制备的钛片进行联合改性制备UAT，扫描电镜观察改性前后材料表面形貌；将UAT分别置于不同浓度（100、200 ng/mL）EPCs-exo溶液中，采用BCA法检测其体外吸附及释放EPCs-exo能力。然后，将UAT置于含不同浓度EPCs-exo（0、100、200 ng/mL）的DMEM培养液，并与第3代ADSCs复合培养，构建UAT-ADSCs-exo。通过激光共聚焦显微镜观察细胞形态、活/死细胞染色、细胞增殖检测，评价生物相容性；ALP染色及茜素红染色，RT-PCR检测成骨相关基因骨钙素（osteocalcin,OCN）、RUNT相关基因2（RUNT-related transcription factor 2,Runx2）、ALP、Ⅰ型胶原蛋白（collagen type 1,COL-1）和成血管相关基因VEGF，免疫荧光染色观测成骨（OCN）及成血管（VEGF）相关蛋白表达，评价负载EPCs-exo的UAT对ADSCs成骨、成血管分化能力的影响。结果 扫描电镜观察示改性后UAT表面形成了微纳米多级复合结构；UAT 48 h内能吸附约77%EPCs-exo，而吸附在UAT表面的EPCs-exo在8 d内呈连续稳定释放，200 ng/mL组吸附及释放量明显优于100 ng/mL组，差异均有统计学意义（P<0.05）。生物相容性检测示，复合培养后各组细胞均生长良好，其中200 ng/mL组优于其他组，细胞完全铺展，有丰富伪足，活细胞数量及细胞活性均高于其他组（P<0.05）。ADSCs成骨和成血管能力检测示，与其余两组比较，200 ng/mL组ADSCs的ALP活性和矿化能力增强，成骨和成血管基因OCN、Runx2、COL-1、ALP和VEGF表达均增高，OCN和VEGF蛋白亦增高，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 EPCs-exo能有效促进UAT表面ADSCs的黏附、增殖及成骨、成血管分化，其中浓度为200 ng/mL时效果最显著。
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