欧文氏菌SCB125中2—酮醛糖酸还原酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达

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根据酶活测定和PAGE活性染色初步证明欧文氏菌SCB125中存在酶活较高的2-酮醛糖酸还原酶(2-KR),能够以2,5-二酮-D-葡萄糖酸(1)、2-酮-L-古洛糖酸(2)或者2-酮-D-葡萄糖酸(3)为底物。抽提欧文氏菌染色体DNA为模板,利用PCR技术扩增,克隆得到两个2-KR酶基因(tkrA和tkrB),通过酶切和测序证明:2-KR A基因发生多处突变,而2-KR B基因保守。将含有这两个基因的片段分别连接到表达载体pBL并转化大肠杆菌DH5α后,均获得高酶活表达。如果进一步用基因剔除的方法破坏欧文
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