【摘 要】
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目的 克隆编码麻牛膝（Cyathula capitata（Wall.） Moq.）CcTSK蛋白的基因全长，通过基因重组技术制备表达质粒，对表达产物进行生物学预测和抑菌分析。方法 以麻牛膝嫩叶为材料，完成CcTSK基因cDNA的克隆。采用生信软件分析该基因及编码蛋白的生物学特征。构建CcTSK基因原核表达载体，并转入大肠埃希菌BL21（DE3）感受态中，IPTG诱导表达，考察CcTSK-GST融合
【基金项目】
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中医药产业发展重大项目（第10包）（No.510201202109711）； 川渝道地药材品质保障关键技术研究与应用（No.2020YFQ0054）；
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目的 克隆编码麻牛膝（Cyathula capitata（Wall.） Moq.）CcTSK蛋白的基因全长，通过基因重组技术制备表达质粒，对表达产物进行生物学预测和抑菌分析。方法 以麻牛膝嫩叶为材料，完成CcTSK基因cDNA的克隆。采用生信软件分析该基因及编码蛋白的生物学特征。构建CcTSK基因原核表达载体，并转入大肠埃希菌BL21（DE3）感受态中，IPTG诱导表达，考察CcTSK-GST融合蛋白的表达菌株对低浓度抗生素的敏感性、自身生长变化及在较高浓度抗生素下的存活率。结果 CcTSK基因的gDNA为12613 bp,CDS为3855 bp，共编码1284个氨基酸。CcTSK蛋白为亲水性不稳定蛋白，没有跨膜结构域，属于没有信号识别功能的非分泌蛋白，亚细胞定位预测该蛋白可能位于细胞核，并且具有核定位信号，含有TPR重复序列与LRR重复序列结构域，二级结构主要有α-螺旋（占53.89%）、无规卷曲（占32.79%）、延伸链（占8.88%）和β-转角（占4.44%）。经IPTG诱导后，CcTSK-GST融合蛋白的表达抑制大肠埃希菌生长。低浓度抗生素测试结果显示，CcTSK-GST表达菌株对氯霉素（chloramphenicol, Cam）最敏感；高浓度抗生素处理下，CcTSK-GST的表达使得抑菌现象显著增强。结论 成功获得编码CcTSK蛋白的基因全长及原核表达质粒，并对其生物学特征进行了分析比较，该蛋白与拟南芥AtTSK蛋白有较高相似性。此外，CcTSK-GST融合蛋白的表达对大肠埃希菌增殖具有抑制作用，并且显著增强抗生素所产生的抑菌现象。
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