【摘 要】
：
目的 研制适合多黏菌素类抗生素耐药性编码基因检测用质粒DNA标准样品。方法 由National Center for Biotechnology Information（NCBI）数据库检索得到mcr-1、mcr-3、mcr-5基因参考序列，构建重组质粒和重组菌株；将重组菌传代至15代检测目标基因的遗传稳定性。提取重组质粒，真空干燥，制得标准样品。将标准样品水化、连续10倍梯度稀释，测定聚合酶链式
【机 构】
：
西北农林科技大学食品科学与工程学院
【基金项目】
：
“十三五”国家重点研发计划重点专项（2017YFC1601400）；
论文部分内容阅读
目的 研制适合多黏菌素类抗生素耐药性编码基因检测用质粒DNA标准样品。方法 由National Center for Biotechnology Information（NCBI）数据库检索得到mcr-1、mcr-3、mcr-5基因参考序列，构建重组质粒和重组菌株；将重组菌传代至15代检测目标基因的遗传稳定性。提取重组质粒，真空干燥，制得标准样品。将标准样品水化、连续10倍梯度稀释，测定聚合酶链式反应（PCR）和实时荧光PCR（RT-qPCR）扩增目标基因的检出限。随机抽取质粒DNA标准样品，采用PCR法和紫外分光光度计法检验样品的均匀性及其在4℃、37℃、-20℃的贮存稳定性。结果 成功获得多黏菌素类抗生素耐药机制编码基因mcr-1、mcr-3、mcr-5基因片段，重组菌15代传代中目的基因遗传稳定。mcr-1、mcr-3、mcr-5标准样品PCR和RT-qPCR最低检出限分别为1.67×104拷贝数/μL和1.67拷贝数/μL、1.31×106拷贝数/μL和13.1拷贝数/μL、1.55×105拷贝数/μL和1.55拷贝数/μL。T检验表明，各基因随机抽取的12管标准样品质量间的F值均小于F临界值，且PCR均可检出，均匀性符合要求。标准样品在4℃贮存90 d、37℃贮存14 d、-20℃贮存360 d，定性、定量检验结果稳定、无极显著性差异。结论 本实验制备的mcr-1、mcr-3、mcr-5质粒DNA标准样品目的基因遗传稳定，均匀性和贮存稳定性良好。本研究结果可用于多黏菌素类抗生素耐药机制的快速预测和相关基因检测的质控样品。
其他文献
语文写作是高中语文的重要组成部分。在写作课上,教师们常常强调技能与材料的堆积,而忽视了对他们的想象联想、逻辑思维和批判审视能力的训练。为了有效地提高学生的写作水平,文章从传统的文学理论出发,探讨如何拓展学生的创造性思考,提高学生的写作水平。
股权分置改革的推行与新“国九条”的出台宣告着市值管理时代的到来,市值管理的重要性与日俱增。由于我国资本市场的弱有效性,上市公司的股价表现与内在价值不一致,如果股价长期高于其内在价值就会形成泡沫积聚风险,一旦泡沫破裂,会给公司与投资者带来较大的损失。相反如果股价长期低于内在价值,则不利于上市公司利用资本市场进行融资,也无法树立良好的企业形象。上市公司如何有效进行市值管理已经成为了一个亟需解决的问题。
作为一种新污染物，微塑料引起的环境问题日益严重，引起的生物效应和健康风险备受关注。微塑料粒径小，比表面积大，易成为各种污染物的载体，影响水生生物的生长繁殖或沿食物链传递，从而威胁到水生生态系统的安全。然而微塑料对水生生物的毒性作用机理尚不明确，因此，微塑料对水生生态系统的影响在很大程度上仍然是未知的。微藻是水生食物链的基础，是水生生态系统的基本组成部分，也是实现多种生态系统功能的关键生物，了解微塑
经济的发展带动了人们生活水平的提高，同时人们在进行生活的过程中，对居住的房屋建筑质量、个性化设计和周围配套设施及人居环境也提出了更高的要求，房屋建筑项目的施工质量得到提高，对建设单位的健康稳定发展有积极的促进作用，同时也可以提高建设单位的经济效益，更可以推动社会经济的发展和进步。在建筑项目具体的施工过程中，对其施工安全的管理也十分关键。建筑施工安全不仅影响着整个工程项目的施工进度和质量，同时也关系
近年来,学界在持续研究清代翁方纲诗学理论的同时,就其书学理论的研究成果同样丰硕。本文主要对翁方纲的书学研究成果进行述评,进而考察翁氏的书学思想与清代碑学发端之间的关系。
建筑施工安全管理工作是保障施工作业顺利开展的前提，创新安全管理工作理念、优化安全管理方法和完善安全管理体系是提升安全管理工作质量的关键。建筑施工单位应结合安全管理工作中突出的问题进行分析和研究，了解和掌握安全管理隐患形成的具体原因，设计更加贴合施工项目的安全管理措施，从而推动建筑工程行业稳定发展。基于此，本文研究了建筑工程施工安全管理的重要性，分析了常见的安全管理问题及成因，提出了优化和改进安全管
网络社会给传统程序法的适用带来了冲击。网络犯罪案件办理程序研究应扎根社会发展和司法实践,将完善法律和运用数字技术相融合,以优化的程序设计,适应数字经济时代的发展要求。面对网络犯罪地的复杂性给传统地域管辖带来的挑战,应探索建立以行为人为核心的管辖原则和"云上"报案系统;针对网络犯罪中海量证据的提取和审查困境,应合理运用抽样验证方式,并设置科学、规范、高效的区块链取证和审查程序。此外,治理网络犯罪还需
居家期间，如何引导和管理好孩子的手机使用，是当前家庭教育面临的难题。家长可以通过制定家庭手机使用契约、精心规划多彩居家生活、引导孩子自主想办法等，使孩子学会合理使用手机。同时，家长在解决手机使用问题的同时，可以触类旁通，帮孩子解决成长中的其他问题，助力孩子健康成长。
＜正＞拥有“赚钱机器”之称的金融行业，以一个又一个百万/千万薪酬的神话，傲然睥睨其他行业。这样的行业，使得以金融学和会计学为代表的经管类成为近十年来录取分数超高的超热门专业类，没有之一。然而，近年来，金融行业也不断地被舆论“妖魔化”，如这两年销声匿迹的P2P，还有蛋壳公寓事件等，都发生在金融领域。
黄易曾主动赠予翁方纲金石拓片并向翁方纲分享访碑雅事。翁方纲在黄易本《熹平石经》拓片上的题跋为黄易本最终被确立为宋拓本奠定了基础。本文围绕翁方纲的题跋内容及《两汉金石记》中对黄易本石经拓片的研究展开，分析黄易本《熹平石经》被确立为现存唯一宋拓本这一概念的生成过程。