【摘 要】
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为研究新城疫病毒（NDV）或H9N2禽流感病毒（AIV）对坦布苏病毒（TMUV）继发感染宿主单核-巨噬细胞的影响及其潜在机制，试验通过实时荧光定量PCR方法检测NDV或H9N2 AIV预先感染鸭单核-巨噬细胞和HD11细胞后再感染TMUV 12,24小时时的TMUV基因组拷贝数，分析是否可用HD11细胞替代鸭单核-巨噬细胞进行后续试验；分别通过高分辨率活细胞共聚焦显微镜和ELISA检测NDV和H9
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽呼吸道传染病创新团队/国家禽类实验动物资源库
【基金项目】
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国家重点研发计划项目（2016YFD0500107-4）； 国家蛋鸡产业技术体系项目（CARS-40-K18）；
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为研究新城疫病毒（NDV）或H9N2禽流感病毒（AIV）对坦布苏病毒（TMUV）继发感染宿主单核-巨噬细胞的影响及其潜在机制，试验通过实时荧光定量PCR方法检测NDV或H9N2 AIV预先感染鸭单核-巨噬细胞和HD11细胞后再感染TMUV 12,24小时时的TMUV基因组拷贝数，分析是否可用HD11细胞替代鸭单核-巨噬细胞进行后续试验；分别通过高分辨率活细胞共聚焦显微镜和ELISA检测NDV和H9N2 AIV感染12,24 h对HD11细胞中活性氧（ROS）和Ⅰ型干扰素（IFN）含量的影响；通过实时荧光定量PCR方法分别检测PMA、外源Ⅰ型IFN与细胞共孵育后，感染TMUV 12,24小时时ROS和24小时时Ⅰ型IFN对TMUV基因组在细胞中复制的影响。结果表明：感染12,24小时时，在鸭单核-巨噬细胞中，NDV混合感染组的TMUV基因组拷贝数极显著低于TMUV单独感染组（P＜0.01）;感染12,24小时，H9N2 AIV混合感染组的TMUV基因组拷贝数分别显著和极显著低于TMUV单独感染组（P＜0.05,P＜0.01）。在HD11细胞中，NDV混合感染组的TMUV基因组拷贝数分别显著和极显著低于TMUV单独感染组（P＜0.05,P＜0.01）;H9N2 AIV混合感染组的TMUV基因组拷贝数极显著低于TMUV单独感染组（P＜0.01）。感染12,24小时时，NDV和H9N2 AIV均可极显著提高HD11细胞中ROS的含量（P＜0.01）。感染24小时时，NDV可显著提高IFN-α的含量（P＜0.05）,感染12,24小时时，NDV可极显著提高IFN-β的含量（P＜0.01）;H9N2 AIV可在感染12,24小时时极显著提高IFN-β的含量（P＜0.01）。ROS可在感染TMUV 12,24小时时极显著抑制TMUV基因组的复制（P＜0.01）,Ⅰ型IFN可在感染TMUV 24小时时显著抑制TMUV基因组的复制（P＜0.05）。说明可用HD11细胞替代鸭单核-巨噬细胞进行后续试验；在鸭单核-巨噬细胞中，NDV或H9N2 AIV感染均可以有效抑制TMUV基因组的复制，其作用可能是通过提高ROS和Ⅰ型IFN含量实现的。
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