针对由于鸡毒支原体（Mycoplasma gallisepticum, MG）不同毒株（针对TS-11、6/85、F株疫苗株和S6、R株野毒株）的特定序列,设计出特异性检测引物,对临床免疫MG疫苗株TS-11的鸡群以及父母代（A～H场）鸡群和祖代（I场）鸡群采集毛蛋气囊拭子,A场父母代种鸡群和I场祖代鸡群同时采集咽喉拭子进行MG的PCR鉴别诊断,对临床送检免疫6/85的客户鸡群（J场）采集病料,F株疫苗株进行MG的鉴别诊断,同时采集SPF鸡群咽喉拭子作为阴性对照群,验证该鉴别引物的特异性。结果显示:鉴别引物具有非常好的特异性,SPF鸡群MG的检测均为阴性,不存在假阳性的弊端;临床免疫MG疫苗株6/85的鸡群（J场）存在MG野毒株S6的感染,在免疫后1个月左右采集病料中仍能检出MG 6/85疫苗株。对免疫TS-11的父母代种鸡群（A～H场）和祖代种鸡群（I场）死亡的毛蛋气囊拭子,用PCR检测MG阳性率,结果显示:祖代鸡群（I场）后代死亡的毛蛋气囊评估结果为优,毛蛋气囊拭子MG的PCR鉴别引物检测均为阴性;而父母代鸡群后代死亡的毛蛋气囊从50周龄开始出现浑浊,MG的PCR鉴别引物可同时检出TS-11疫苗毒和野毒株,部分鸡群同时存在R株和S6株两种野毒感染;采集A场父母代种鸡群的咽喉拭子和后代啄壳死亡毛蛋气囊拭子,PCR检测结果显示种鸡群和后代可同时检出野毒株S6和疫苗株TS-11。这表明种鸡群MG的感染,可通过垂直传播感染其后代。本研究设计的MG鉴别引物,可将不同MG疫苗株（TS-11、F株、6/85）与野毒株（S6株、R株）区分,为临床MG的鉴别诊断和种鸡群的MG感染状态评估提供积极的指导意义。