【摘 要】
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为了进行鹰嘴豆(Cicer arietinum L.)遗传多样性分析,以鹰嘴豆叶片基因组DNA为模版,通过Mg2+、DNA聚合酶、模版DNA、dNTPs以及引物的用量,设计5因素4水平的正交试验对SSR-PCR
【机 构】
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石河子大学生命科学学院,新疆农业科学院农作物品种资源研究所
【基金项目】
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新疆维吾尔自治区自然科学基金“鹰嘴豆种质资源遗传多样性研究”(2011211A089)
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为了进行鹰嘴豆(Cicer arietinum L.)遗传多样性分析,以鹰嘴豆叶片基因组DNA为模版,通过Mg2+、DNA聚合酶、模版DNA、dNTPs以及引物的用量,设计5因素4水平的正交试验对SSR-PCR反应体系进行优化,并利用梯度PCR对退火温度进行选择。结果表明:优化的SSR-PCR扩增10μL体系为1.5μL 1×PCR Buffer、1.5mmol/L Mg2+、1.5U TaqDNA聚合酶、0.75μmol/L SSR引物、15ng模版DNA、250μmol/L dNTPs。扩增程序:95℃预变性5min;94℃变性30s,52.3℃退火30s,72℃延伸90s,共35个循环;最后72℃延伸5min。所有SSR引物在优化的反应体系中基本能有效扩增,得到特异性。
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