【摘 要】
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目的 建立人血清淀粉样蛋白1单体(HSAA1)的制备方法,并考察其活性及稳定性.方法 利用基因重组技术构建重组HSAA1大肠杆菌工程菌,变性条件下进行层析纯化,透析复性纯化后蛋白,采用酶联免疫吸附法检测复性后SAA1的生物活性,在不同温度及不同pH值的缓冲液中考察其储存稳定性.结果 SAA1在大肠杆菌E.coli中可溶性表达,纯化后蛋白纯度超过95％,透析复性后蛋白二级结构主要为α螺旋结构;SAA1质量浓度在0.01～2.50μg/mL范围内与吸光度值呈线性关系;SAA1在中性及偏碱性条件下的稳定性高于酸
【机 构】
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四川省乐山市人民医院,四川 乐山 614000;中国科学院过程工程研究所,北京 100190
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目的 建立人血清淀粉样蛋白1单体(HSAA1)的制备方法,并考察其活性及稳定性.方法 利用基因重组技术构建重组HSAA1大肠杆菌工程菌,变性条件下进行层析纯化,透析复性纯化后蛋白,采用酶联免疫吸附法检测复性后SAA1的生物活性,在不同温度及不同pH值的缓冲液中考察其储存稳定性.结果 SAA1在大肠杆菌E.coli中可溶性表达,纯化后蛋白纯度超过95％,透析复性后蛋白二级结构主要为α螺旋结构;SAA1质量浓度在0.01～2.50μg/mL范围内与吸光度值呈线性关系;SAA1在中性及偏碱性条件下的稳定性高于酸性条件;在pH 8的缓冲液体系中添加25％甘油,室温存放90 d后,SAA1无明显降解.结论 采用原核表达体系,结合变性纯化及透析复性可获得高纯度的重组SAA1,可作为免疫检测的标准品和校准品,也可作为抗原制备相应单克隆抗体及多克隆抗体.
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