【摘 要】
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目的:合成一种新型重组α型干扰素(IFN-α)基因序列, 使其在大肠杆菌中表达, 并检测其生物活性.方法:人工合成新型重组IFN-α基因全长, 将PCR扩增产物与pUC18进行双酶切后构
【机 构】
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空军总医院干部病房三区,空军总医院肝胆外科
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目的:合成一种新型重组α型干扰素(IFN-α)基因序列, 使其在大肠杆菌中表达, 并检测其生物活性.方法:人工合成新型重组IFN-α基因全长, 将PCR扩增产物与pUC18进行双酶切后构建克隆载体, 并转化至大肠杆菌, 经蓝白斑筛选, 提取质粒, 以EcoR I和BamH I双酶切, 插入表达载体pBV220, 转化至大肠杆菌, 42℃热诱导表达目的蛋白.超声破菌, 抽提复性后以Sephacryl S-200HR分离获得目标蛋白.在转染有乙型肝炎病毒基因的人肝癌细胞系2.2.15细胞中, 研究其对HBsAg和HBeAg的分泌的影响.结果:重组质粒读码框经测序与预期一致, 表达产物经SDS-PAGE分析获得证实, 与2.2.15细胞培养8 d, 对HBeAg和HBsAg的分泌具有一定的抑制作用.结论:成功地构建原核表达载体pBV220-IFN-α, 并使其在大肠杆菌中获得融合表达, 重组表达的新型重组IFN-α具有抗病毒作用.
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