【摘 要】
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[目的]研究PLIN2基因对秦川牛脂肪细胞分化过程中脂滴形成的功能。[方法]以秦川牛原代脂肪细胞为试验材料,采用高干扰效率的si-PLIN2及对照组si-NC,超表达PLIN2基因真核表达载体pcDNA3.1（+）-PLIN2及对照pcDNA3.1（+）-empty vector（pcDNA3.1（+）-EV）,转染秦川牛脂肪细胞并进行相关基因mRNA及蛋白水平表达量验证,并对转录因子C/EBPα
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（31972994）； 国家肉牛牦牛产业技术体系建设项目（CARS-37）； 国家重点研发计划项目（2018YFD0501700）； 陕西省农业科技创新转化项目（NYKJ-2018-YL09）； 宁夏回族自治区重点研发计划项目（
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[目的]研究PLIN2基因对秦川牛脂肪细胞分化过程中脂滴形成的功能。[方法]以秦川牛原代脂肪细胞为试验材料,采用高干扰效率的si-PLIN2及对照组si-NC,超表达PLIN2基因真核表达载体pcDNA3.1（+）-PLIN2及对照pcDNA3.1（+）-empty vector（pcDNA3.1（+）-EV）,转染秦川牛脂肪细胞并进行相关基因mRNA及蛋白水平表达量验证,并对转录因子C/EBPα是否能结合在PLIN2基因启动子区域进行验证。[结果]si-PLIN2处理组中CREB基因表达量无明显变化,C/EBPβ和C/EBPα基因mRNA水平表达量与si-NC对照组相比分别出现显著或极显著下调。与对照组pcDNA3.1（+）-EV相比,过表达组pcDNA3.1（+）-PLIN2 CREB相对表达量极显著上调,C/EBPα和C/EBPβ基因相对表达量上调,但差异不显著。Western blot蛋白表达水平检测发现,si-PLIN2中磷酸化水平CREB（phospho-CREB,p-CREB）、C/EBPβ、C/EBPα的表达量显著低于对照组si-NC,过表达组上述转录因子表达量未出现明显上调。ChIP试验结果表明,转录因子C/EBPα可以结合在PLIN2基因启动子区域,并调控秦川牛PLIN2基因的表达。[结论]下调秦川牛PLIN2基因可反馈抑制上游cAMP-PKA信号通路p-CREB、C/EBPβ、C/EBPα3个转录因子的表达,从而抑制秦川牛脂肪细胞分化过程中脂滴生成。
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