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目的
对磁珠法结合定量PCR(quantitative PCR，qPCR)检测肠道病毒71型灭活疫苗(Vero细胞)(EV71疫苗)中宿主DNA残留量进行适用性验证及应用。
方法利用微磁珠与蛋白溶液中DNA的特异性结合，来提取样品中残留的宿主细胞DNA。将已知浓度的细胞DNA对照系列稀释后，作为标准品DNA与提取的DNA同时进行qPCR扩增。根据标准品DNA的循环阈值与浓度之间的线性关系，对未知样品中残留DNA进行定量分析。
结果标准品检测范围在0.03～3 000.00 pg/反应。该方法的标准曲线决定系数≥0.980，扩增效率为90.0%～110.0%。质控样品回收率为50%～150%，相对标准偏差均小于30%。实验结果的各项参数均在要求范围内。
结论磁珠法可解决残留DNA检测中样品前处理的技术难点，qPCR能够简便、快速、准确地对EV71疫苗生产过程中的DNA残留量进行定量测定。该法适用于EV71疫苗中DNA残留量的检测及疫苗生产过程和其成品的质量控制，对其他采用同样细胞基质的病毒性疫苗质量控制具有借鉴意义。