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doi：10.15889/j.issn.1002-1302.2016.10.129
摘要：为解决秸秆饲料化转化中消化率低的难题，开发秸秆分解与软化技术，优先分解纤维素和半纤维素，促进秸秆资源的饲料化利用与推广，以真菌菌株为中间载体，以小麦秸秆为原料，将秸秆转化为菌丝体饲料，并进行秸秆饲料化规模生产的效果评价研究。以显色反应和生长速度为指标进行菌株初筛，筛选发菌生长速度快并且适合规模化生产菌丝体饲料的菌株，并进一步对其营养成分进行动态监测，筛选降解纤维素和半纤维素能力强的菌株，为菌丝体饲料规模化生产奠定基础。结果表明，红平菇具有较强的生长速度，在Bavendamm平板上和RB亮蓝平板上生长速度最快，分别在6 d和9 d长满平板，红平菇对麦秸的纤维素降解率高达54.8%，粗蛋白降解率高达86.58%，以红平菇开发的菌丝体饲料具有较好的应用效果。
关键词：麦草；红平菇；降解；菌丝体蛋白
中图分类号： S816.5 3文献标志码： A文章编号：1002-1302（2016）10-0448-03
收稿日期：2015-12-03
基金项目：2015年江苏省“博士-企业集聚计划”项目；江苏省农业科技自主创新资金[编号：CX（13）5012、CX（12）1002]；江苏省自然科学基金青年基金（编号：BK20140742）；现代农业产业技术体系建设专项资金（编号：CARS24）。
作者简介：侯立娟（1981—），女，吉林松原人，博士，副研究员，从事食用菌栽培和菌糠综合利用研究。E-mail：mybailinggu@126.com。我国年产各类秸秆约9亿t，除部分机械还田外，大部分被焚烧，用作饲料的不足10%，秸秆利用率不高，国家和地方政府开始重视秸秆的综合利用[1]。秸秆作为农作物的主要副产品，是一种重要的可再生资源，秸秆综合利用中，将秸秆转化为反刍动物可利用饲料具有较高价值。随着我国畜牧业的发展，畜牧饲料所需粗蛋白缺口庞大，开发高品质的秸秆饲料具有极广阔的市场前景。 本试验采用室内分析和室外栽培相结合的方法，选出8种适合用小麦秸秆栽培的不同菌株为试验材料，采用Bavendamm显色、RB亮蓝显色反应进行初筛降解木质纤维素能力强的菌株，再结合室外栽培试验，缩小并锁定优良菌株，通过营养成分分析和降解指标确定在小麦秸秆上具有高效降解木质纤维素的专一品种，为开发秸秆饲料奠定理论基础，同时为麦草资源化利用提供有效途径。
1材料与方法
1.1菌株
适合小麦秸秆生料栽培的菌株共8个，包括红平菇、杂3、苏5、鸡腿1号、鸡腿2号、棕蘑、双孢蘑菇W2000和W192。均由江苏省农业科学院蔬菜研究所食用菌项目组提供。
1.2栽培配方
栽培基质组成为：80%小麦秸秆、10%饼肥和10%麸皮。
1.3试验方法
1.3.1菌株培养方法
1.3.1.1菌种活化供试菌株在PDA培养基的斜面上接种进行活化培养。被活化了的菌种再接种于PDA培养基平板上，25 ℃培养，7 d后备用。
1.3.1.2菌丝的显色试验（1）PDA-Bavendamm 显色试验（漆酶鉴定培养基）：在纯培养中，加入0.4 mmol/L的鞣酸，pH值5.5，用打孔器制成菌塞，定量接种于平板上，25 ℃条件下培养。记录菌落周围有无褐色轮环产生及显色程度，有褐色轮环者记为“ ”，反之记为“-”，并记录显色时间和显色程度[2]。（2）PDA-RB亮蓝显色法（过氧化物酶鉴定培养基）：将625 mg/L RB 亮蓝单独灭菌后，在无菌条件下，与PDA 培养基混匀，制成PDA-RB 亮蓝平板，接种后25 ℃培养，观察记录平板上有无黄色轮环产生，有黄色轮环记为“ ”，反之记为“-”，并记录显色时间和显色程度[3]。
1.3.1.3菌丝生长速度测量方法用打孔器在PDA培养基上打孔，然后将菌饼接种在70 mm的PDA 培养基上，接种 1～2 d菌丝已经定植并正常生长时，以菌饼为中心，沿菌丝生长的前沿划“十”字线，2条线之间的距离与时间之比即为菌丝生长速度（mm/d）。
1.4培养料建堆发酵
按照“1.2”节介绍的配方进行备料，小麦秸秆必须新鲜、无霉、无虫。将小麦秸秆铡成长5～8 cm，饼肥进行粉碎后备用。将小麦秸秆用1%石灰水预湿4 d，尽量让培养料浸透水分。按照1层小麦秸秆、1层麸皮、1层饼肥的顺序在日光温室进行建堆，建堆高度约1.5 m，堆宽约1.6 m，长度依场地和培养料总量而定。培养料的水分控制在65 %左右，可边建堆边淋水。建堆完毕和每次翻堆后都要打孔通气，可以在料堆的两侧或上部进行打孔，以利通气好氧发酵。
建堆后观察料温，达到65 ℃进行第1次翻堆，将培养料上下、内外颠倒。料温再次升到60 ℃时第2次和第3次翻堆，建堆的时间随着季节、气温的高低和培养料的多少等灵活掌握，如果气温过低，可在料堆上覆盖1层薄膜。一般翻堆5～7次，堆料時间约30 d。发酵好的料呈深棕色，含水量在65%左右，pH值为 7或略高。在料中外层出现灰白色的高温放线菌，培养料不黏手且有弹性，小麦秸秆有一定的拉力，说明发酵正常。
1.5装袋、接种
栽培用的出菇袋根据生产季节选用宽17、20 cm或 22 cm 的聚乙烯料袋，袋厚度为2.5～5 μm，袋长40～50 cm，在夏季或早秋进行打包生产时，由于温度较高，一般选用较小口径的袋子，防止内部温度不易散发造成菌丝受高温而“烧”死。装袋的同时进行接种，菌种扒成玉米粒到豌豆粒大小，装袋时先在筒袋中加入1层菌种，装入约1/3袋高的培养料，播入第2层菌种，然后再装入约1/3袋高的培养料，播入第3层菌种，然后将培养料装满袋，播入第4层菌种，播种量约为15%，袋口用扎绳扎上，在菌袋外侧接种层的部位用缝衣针转圈刺20个左右的孔，以利排热和散气。
摘要：为解决秸秆饲料化转化中消化率低的难题，开发秸秆分解与软化技术，优先分解纤维素和半纤维素，促进秸秆资源的饲料化利用与推广，以真菌菌株为中间载体，以小麦秸秆为原料，将秸秆转化为菌丝体饲料，并进行秸秆饲料化规模生产的效果评价研究。以显色反应和生长速度为指标进行菌株初筛，筛选发菌生长速度快并且适合规模化生产菌丝体饲料的菌株，并进一步对其营养成分进行动态监测，筛选降解纤维素和半纤维素能力强的菌株，为菌丝体饲料规模化生产奠定基础。结果表明，红平菇具有较强的生长速度，在Bavendamm平板上和RB亮蓝平板上生长速度最快，分别在6 d和9 d长满平板，红平菇对麦秸的纤维素降解率高达54.8%，粗蛋白降解率高达86.58%，以红平菇开发的菌丝体饲料具有较好的应用效果。
关键词：麦草；红平菇；降解；菌丝体蛋白
中图分类号： S816.5 3文献标志码： A文章编号：1002-1302（2016）10-0448-03
收稿日期：2015-12-03
基金项目：2015年江苏省“博士-企业集聚计划”项目；江苏省农业科技自主创新资金[编号：CX（13）5012、CX（12）1002]；江苏省自然科学基金青年基金（编号：BK20140742）；现代农业产业技术体系建设专项资金（编号：CARS24）。
作者简介：侯立娟（1981—），女，吉林松原人，博士，副研究员，从事食用菌栽培和菌糠综合利用研究。E-mail：mybailinggu@126.com。我国年产各类秸秆约9亿t，除部分机械还田外，大部分被焚烧，用作饲料的不足10%，秸秆利用率不高，国家和地方政府开始重视秸秆的综合利用[1]。秸秆作为农作物的主要副产品，是一种重要的可再生资源，秸秆综合利用中，将秸秆转化为反刍动物可利用饲料具有较高价值。随着我国畜牧业的发展，畜牧饲料所需粗蛋白缺口庞大，开发高品质的秸秆饲料具有极广阔的市场前景。 本试验采用室内分析和室外栽培相结合的方法，选出8种适合用小麦秸秆栽培的不同菌株为试验材料，采用Bavendamm显色、RB亮蓝显色反应进行初筛降解木质纤维素能力强的菌株，再结合室外栽培试验，缩小并锁定优良菌株，通过营养成分分析和降解指标确定在小麦秸秆上具有高效降解木质纤维素的专一品种，为开发秸秆饲料奠定理论基础，同时为麦草资源化利用提供有效途径。
1材料与方法
1.1菌株
适合小麦秸秆生料栽培的菌株共8个，包括红平菇、杂3、苏5、鸡腿1号、鸡腿2号、棕蘑、双孢蘑菇W2000和W192。均由江苏省农业科学院蔬菜研究所食用菌项目组提供。
1.2栽培配方
栽培基质组成为：80%小麦秸秆、10%饼肥和10%麸皮。
1.3试验方法
1.3.1菌株培养方法
1.3.1.1菌种活化供试菌株在PDA培养基的斜面上接种进行活化培养。被活化了的菌种再接种于PDA培养基平板上，25 ℃培养，7 d后备用。
1.3.1.2菌丝的显色试验（1）PDA-Bavendamm 显色试验（漆酶鉴定培养基）：在纯培养中，加入0.4 mmol/L的鞣酸，pH值5.5，用打孔器制成菌塞，定量接种于平板上，25 ℃条件下培养。记录菌落周围有无褐色轮环产生及显色程度，有褐色轮环者记为“ ”，反之记为“-”，并记录显色时间和显色程度[2]。（2）PDA-RB亮蓝显色法（过氧化物酶鉴定培养基）：将625 mg/L RB 亮蓝单独灭菌后，在无菌条件下，与PDA 培养基混匀，制成PDA-RB 亮蓝平板，接种后25 ℃培养，观察记录平板上有无黄色轮环产生，有黄色轮环记为“ ”，反之记为“-”，并记录显色时间和显色程度[3]。
1.3.1.3菌丝生长速度测量方法用打孔器在PDA培养基上打孔，然后将菌饼接种在70 mm的PDA 培养基上，接种 1～2 d菌丝已经定植并正常生长时，以菌饼为中心，沿菌丝生长的前沿划“十”字线，2条线之间的距离与时间之比即为菌丝生长速度（mm/d）。
1.4培养料建堆发酵
按照“1.2”节介绍的配方进行备料，小麦秸秆必须新鲜、无霉、无虫。将小麦秸秆铡成长5～8 cm，饼肥进行粉碎后备用。将小麦秸秆用1%石灰水预湿4 d，尽量让培养料浸透水分。按照1层小麦秸秆、1层麸皮、1层饼肥的顺序在日光温室进行建堆，建堆高度约1.5 m，堆宽约1.6 m，长度依场地和培养料总量而定。培养料的水分控制在65 %左右，可边建堆边淋水。建堆完毕和每次翻堆后都要打孔通气，可以在料堆的两侧或上部进行打孔，以利通气好氧发酵。
建堆后观察料温，达到65 ℃进行第1次翻堆，将培养料上下、内外颠倒。料温再次升到60 ℃时第2次和第3次翻堆，建堆的时间随着季节、气温的高低和培养料的多少等灵活掌握，如果气温过低，可在料堆上覆盖1层薄膜。一般翻堆5～7次，堆料時间约30 d。发酵好的料呈深棕色，含水量在65%左右，pH值为 7或略高。在料中外层出现灰白色的高温放线菌，培养料不黏手且有弹性，小麦秸秆有一定的拉力，说明发酵正常。
1.5装袋、接种
栽培用的出菇袋根据生产季节选用宽17、20 cm或 22 cm 的聚乙烯料袋，袋厚度为2.5～5 μm，袋长40～50 cm，在夏季或早秋进行打包生产时，由于温度较高，一般选用较小口径的袋子，防止内部温度不易散发造成菌丝受高温而“烧”死。装袋的同时进行接种，菌种扒成玉米粒到豌豆粒大小，装袋时先在筒袋中加入1层菌种，装入约1/3袋高的培养料，播入第2层菌种，然后再装入约1/3袋高的培养料，播入第3层菌种，然后将培养料装满袋，播入第4层菌种，播种量约为15%，袋口用扎绳扎上，在菌袋外侧接种层的部位用缝衣针转圈刺20个左右的孔，以利排热和散气。