【摘 要】
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目的 验证质谱筛选的结果,确定对氧磷酶2（PON2）是否为蛋白质精氨酸甲基转移酶1（PRMT1）的底物蛋白。方法 用白细胞介素-4（IL-4）刺激A549细胞后,用免疫沉淀法捕获发生精氨酸非对称性二甲基化修饰的蛋白,用梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳分析捕获的蛋白,通过银染显示差异性条带,质谱分析差异性条带中的蛋白种类。用免疫沉淀检验PON2的甲基化修饰状态。检测PON2和PRMT1对IL-4表达的浓度依赖
【基金项目】
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陕西省自然科学基础研究计划（2020JM-064）； 东莞市社会科技发展项目（202050715060193）；
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目的 验证质谱筛选的结果,确定对氧磷酶2（PON2）是否为蛋白质精氨酸甲基转移酶1（PRMT1）的底物蛋白。方法 用白细胞介素-4（IL-4）刺激A549细胞后,用免疫沉淀法捕获发生精氨酸非对称性二甲基化修饰的蛋白,用梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳分析捕获的蛋白,通过银染显示差异性条带,质谱分析差异性条带中的蛋白种类。用免疫沉淀检验PON2的甲基化修饰状态。检测PON2和PRMT1对IL-4表达的浓度依赖性和时间依赖性。用免疫共沉淀检测PON2和PRMT1的相互作用,并在MS203抑制Ⅰ型PRMT后检测PON2的甲基化修饰水平的变化。诱导小鼠哮喘模型,检测PON2表达的组织细胞类型,以及肺组织中PON2和PRMT1的表达水平。结果 （1）质谱分析显示在IL-4处理的A549细胞中检出311个差异显示的蛋白,PON2为其中之一。（2）免疫沉淀显示,IL-4可促进A549细胞中PON2发生精氨酸非对称性二甲基化修饰,但IL-4刺激对PON2的表达水平无影响。（3）PON2与PRMT1有相互作用,IL-4可促进PON2与PRMT1结合,抑制Ⅰ型PRMT活性可以削弱IL-4对PON2发生精氨酸非对称性二甲基化修饰的促进作用。（4）PON2主要在小鼠气道上皮表达,且PON2的表达水平在对照组与哮喘组组织间差异无统计学意义（P>0.05）。结论 PON2为PRMT1的底物蛋白。IL-4可以促进PON2发生精氨酸非对称性二甲基化修饰。
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