【摘 要】
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目的 探究雷公藤红素(celastrol)诱导细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生在介导细胞DNA损伤中的作用及对肝癌细胞凋亡的影响.方法 人肝癌细胞经雷公藤红素处理后,镜下观察细胞形态变化;MTT法测定肝癌细胞的存活率;Hoechst 33258染色观察肝癌细胞核变化;流式细胞术检测细胞死亡;CM-H2DCFDA探针检测细胞内ROS水平;免疫荧光方法检测细胞内DNA损伤标志蛋白γ-H2AX的荧光强度;Western blot检测 γ-H2AX、caspase-3、P
【机 构】
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广西医科大学基础医学院生理学教研室,广西 南宁 530021;广西中医药大学基础医学院生理学教研室,广西 南宁 530200;广西医科大学基础医学院生理学教研室,广西 南宁 530021;广西医科大学
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目的 探究雷公藤红素(celastrol)诱导细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生在介导细胞DNA损伤中的作用及对肝癌细胞凋亡的影响.方法 人肝癌细胞经雷公藤红素处理后,镜下观察细胞形态变化;MTT法测定肝癌细胞的存活率;Hoechst 33258染色观察肝癌细胞核变化;流式细胞术检测细胞死亡;CM-H2DCFDA探针检测细胞内ROS水平;免疫荧光方法检测细胞内DNA损伤标志蛋白γ-H2AX的荧光强度;Western blot检测 γ-H2AX、caspase-3、PARP等蛋白表达水平.结果 雷公藤红素可显著抑制肝癌细胞的存活,并可升高细胞内ROS水平,呈浓度依赖性关系(P<0.05);Hoechst染色观察到细胞凋亡特点;Western blot结果显示,雷公藤红素组γ-H2AX表达增加,caspase-3被激活,PARP蛋白切割也明显增加;在加入ROS抑制剂NAC后,可逆转上述结果(P<0.05,P<0.01).结论 雷公藤红素可诱导肝癌细胞内ROS聚集,高水平的ROS引起细胞DNA损伤,最终诱导细胞凋亡.
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